经典遗传学实验(绝对经典).pdfVIP

遗传学实验指导 山东农业大学遗传学教研室 二零一六年 目 录 实验一 植物花粉母细胞减数分裂制片和染色体观察 实验二 植物根尖压片技术 实验三 染色体组型分析 实验四 基因的分离、独立分配和互作，连锁基因的遗传分析 实验五 果蝇的形态鉴别和饲养管理 实验六 植物DNA 的提取与定量分析 实验七 植物的SSR 分析 （待修改） 实验八 遗传连锁图谱构建和QTL 分析 （待修改） 实验一 植物花粉母细胞减数分裂制片和染色体观察 一、实验原理 减数分裂是生物在性母细胞成熟形成配子过程中发生的一种特殊有丝分裂，它包括连续两次 的细胞分裂，第一次分裂是减数的，第二次是等数的。第一次分裂的前期较长，染色体变化较复 杂，可细分为 5 个时期，即细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。染色体在减数分裂的行 为对遗传物质的分配和重组产生重大影响。 高等植物在形成雄配子的过程中，花药内的小孢子母细胞（2n ），经过减数分裂最终产生四个 小孢子。每个小孢子内的染色体数目已减半为n 。以后每个小孢子进一步发育为花粉粒。由于植物 花药取材容易，操作方便，一般作为减数分裂制片材料。在适宜的时期采集植物的花蕾，经固定 液杀死固定，使细胞保持活体时形态。然后进行压片染色等处理，制成减数分裂玻片标本，在显 微镜下进行观察，可以看到小孢子母细胞的减数分裂过程（即染色体由双倍变为单倍体的过程）， 研究染色体在形态和数量上的动态变化特点。 二、实验材料和实验用品 1．实验材料 玉米雄花序 2．实验用品 显微镜、解剖针、载玻片、盖玻片、镊子、培养皿、酒精灯、吸水纸、纱布、刀片、滤纸、 火柴、等。 3．实验药品 无水乙醇、95%乙醇、重铬酸钾、浓盐酸、浓硫酸、冰醋酸、二甲苯、加拿大树胶和洋红（或 苏木精）。 三、实验方法与步骤 1．取材：选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键性步骤。不同植物取材时 期不同。 玉米：在抽雄前两周左右（大喇叭口期），用手指从喇叭口处向下挤捏叶鞘，触到有松软感处， 即是雄花序所在部位。在该处用刀片纵向划一切口，用镊子取出花序分枝。此时雄花序先端小穗 颖长4mm 左右，花药长2～3mm ，每一分枝中上部小穗发育最早。 取材时间一般在上午9 时～10 时，不同材料间稍有差异。 2．固定：取下的材料应立即放入固定液中杀死固定。在4～15℃条件下，一般固定时间为24 小时。固定后的材料先用95%酒精漂洗至无醋酸气味，再移到70%酒精中置于冰箱内保存。常用 的固定液是法氏固定液，在使用这种固定液时应注意现配现用，固定时不要在阳光下暴晒。 3．染色和压片：先将已固定的材料置于培养皿内并倒入少许保存液。用镊子摘取一个适当大 小的小穗或花蕾放在吸水纸上吸掉多余的酒精，然后放在载玻片中央。用解剖针挑出2～3 个花药， 1 并立即滴醋酸洋红或醋酸铁矾苏木精染色液于花药上。用解剖针将花药横向切断，并从一端向切 口轻轻挤压花药，使花粉母细胞从切口处逸出。然后用镊子除尽花药壁等杂物。这是压片优劣的 关键步骤之一，如不去净残渣，则不容易把分裂的细胞压平，使染色体不容易分散开，并且在制 作永久片的过程中，细胞会从载玻片上大量脱落。去净残渣后，在低倍镜下进行初步镜检，如果 花粉母细胞处于减数分裂时期，即可加上盖玻片。加盖玻片时，先使盖玻片的一边放在载玻片上， 待染液布满整个边缘时，左手握镊子顶住盖玻片，右手握解剖针托住盖玻片轻轻放下。加上盖玻 片以后，如有多余染色液，可用吸水纸吸去；如染色液不能布满盖玻片，则在盖玻片一边稍加染 色液，然后在酒精灯上烤片。烤片时，用手平持片子在酒精灯上方来回移动，并经常将片子放在 手背上试温，以片子不烫手为宜，可反复进行多次。烤片是制片过程中的一项很重要的步骤。通 过烤片可使细胞质颜色变浅，而染色体能得到充分鲜明的着色。烤片以后可在盖玻片上加一小块 吸水纸，以拇指或用带橡皮头的铅笔轻压盖片。应注意不要使盖片移动。如果镜检发现染色体染 色太浅，可在盖玻片周围稍加染色液再烤；如果染色太深，可从盖玻片一边滴加 45%冰醋酸，在 另一边用吸水纸吸，让冰醋酸从盖玻片下流过直至细胞质颜色较浅而染色体着色明显清析为止。 4．制作永久片：要使片子能长期保存应用，可制成