转化生长因子β3在子宫肌瘤组织中的表达和消癥煎膏的干预作用论文.docVIP

　　转化生长因子β3在子宫肌瘤组织中的表达和消癥煎膏的干预作用论文 蒋秋燕 唐厚秀 蒋桂秀 苏莉鸣, 唐乾利 【摘要】 目的研究消癥煎膏对大鼠子宫肌瘤以及子宫肌瘤中TGF-β3的影响。方法造模大鼠60只，随机分成5组，每组12只：实验组消癥煎膏分高、中、低3个剂量组，直肠给药；中桂组，予桂枝茯苓胶囊溶液灌服，每次0.5 ml/kg；模型组。另设空白组12只，每天灌服0.9%生理盐水，0.5 ml/kg/次.freelRNA的水平上升,而加入TGF-β3上升更明显。Arici等［2］也研究证实在子宫肌瘤和肌层细胞中加入TGF中和抗体1型和3型胶原蛋白mRNA显著下降。因此，抗TGF物质可以抑制子宫肌瘤生长，TGF-β抗体是一种可能用于治疗子宫肌瘤的新药。中医中药在降低生长因子、细胞因子表达方面有着非常明显的效果。如何寻找一种更为有效的中草药，抑制或降低UL中生长因子的表达，正是本实验的主要目的。 1 器材 1.1 对象两个月龄左右雌性大鼠Sprague Dag/ml）,上海通用药业股份有限公司产品，批黄体酮注射液（20 mg/ml）,上海通用药业股份有限公司产品,批号050901。桂枝茯苓胶囊(0.31 g/粒)，江苏康缘药业股份有限公司产品，批号200609；兔抗人多克隆TGF-β3及SABC即用型试剂盒均购自上海蓝创生物科技发展有限公司产品，批号050102。 1.3 仪器石蜡切片机（英国），Olympus 生物显微照相系统（日本），Siemens DME2冰箱（德国），Cmias-2000真彩色病理图像分析系统软件(北京麦克奥迪公司)，电子秤 JD1000-2(沈阳龙腾电子称量有限公司)。 2 方法 2.1 复制大鼠UL模型本实验参照文献［3，4］的实验方法，综合其优点造模。购回大鼠86只，体重180～220 g，适应性饲养1周。随机抽出14只作空白对照组, 不加任何干预因素,颗粒麦麸喂养；其余大鼠进行造模，每只肌注苯甲酸雌二醇0.12 mg/0.06 ml，3次/周；每只肌注黄体酮1 mg/ 0.05 ml，1次/周；共15周。造模过程中模型组大鼠死亡2只（第51天死亡1只，第68天死亡1只），分析原因可能为：人为摔伤致死。尸检示：子宫直径稍增大，血管数量增多并且增粗充盈，尚未见肌瘤形成。 第15周最后1天，从造模组中随机抽取大鼠10只,对照组2只, 称重，断头处死,剖腹观察子宫形态，测量宫颈、宫体最大直径，称子宫重量，计算子宫系数(子宫重mg/g体重)，然后用10%福尔马林溶液固定，取其最大横切面，石蜡包埋切片，HE染色，Olympus显微镜下测子宫壁肌层情况。 成瘤的判断标准［5］：子宫肌细胞显著增生，体积增大，排列密集;核体积增大，核仁肥大，见少数畸形核;细胞内含有丰富的有致密小体的肌微丝，线粒体肥大增生，数目增加，嵴模糊，粗面内质网扩张，游离核糖体增多;细胞周围可见大量增生、紊乱、排列不规则的胶原纤维。 本实验造模病理切片及大体标本图片如下图：正常大鼠子宫组织切片见图1（HE染色×200），模型大鼠UL组织见图2（HE染色×200）；模型鼠与空白组大鼠子宫各项指标以及造模抽样结果见表1。 2.2 分组及给药方法把造模成瘤的60只大鼠，随机分成5组，每组12只：消癥煎膏高、中、低3个剂量组（分别简称中高组、中中组、中低组）、模型空白对照组（简称模型组）、桂枝茯苓胶囊组（简称中桂组）；另设空白对照组（简称空白组）亦12只，每组动物体重无显著性差异。 给药方法：给药前轻按摩大鼠肛门,促其排便,.freel处。如发现有药栓排出,及时补上，给药期间称体重1次/周，随时调整给药剂量。共给药4周，停药后第1天内处死大鼠，处死当天不给药。中高组按1.632 ml/（kg·d）(相当于成人用量30倍)；中中组按0.816 ml /（kg·d）(相当于成人用量20倍)；中低组：按0.40 ml/kg·d(相当于成人用量10倍)，均直肠给药，3次/d。中桂组予桂枝茯苓胶囊溶液灌服，0.5 ml/（kg·d）/次，3次/d。模型组以及空白组：每天灌服0.9%生理盐水，0.5 ml/次，3次/d。 2.3 检测项目 2.3.1 一般观察实验期间要注意观察大鼠的精神状态、皮毛的色泽、状态，饮食、体重、粪便、发情周期、对外界刺激的反应能力以及活动休息时的情况：休息的姿势、眼裂大小、黏膜色泽等，做出与用药前的对比分析。表1 模型鼠与空白组大鼠子宫各项指标以及造模抽样结果(略) 2.3.2 大鼠TGF-β3的测定将切除的新鲜肌瘤及部分正常子宫肌组织用10%甲醛液固定4～8 h,继而制备蜡块，5 μm切片，免疫组织化学染色, 兔抗人多克隆TGF-β3及SABC即用型试剂盒，按试剂盒说明书严格