碳源对里氏木霉QM9414胞外酶基因表达的影响.pdfVIP

第 37卷第3期 西南民族大学学报 ‘自然科学版 Mav．2011 JoumalofSouthwestUniversityforNationalities．NaturalScienceEdition 文章编号：1003—2843(2011)03—04l1—08 碳源对里氏木霉 QM9414胞外酶基因表达的影响 伍红 ，陈秀珍 ，董志扬 ，安莉颖 ，施思 (1．西南民族大学，四川成都 61004l；2．中科院微生物所，北京 l00101) 摘 要 ：对里氏木霉QM9414在纤维素、木聚糖、乳糖、甘油、葡萄糖等不同碳源培养条件下，纤维素酶、木聚糖酶的 活性差异以及其培养液中总分；强蛋 白的表达差异进行 了分析．发现纤维素、乳糖和木聚糖均可诱导纤维素酶和木聚糖酶 的合成：而葡萄糖是两种酶合成的抑制性碳源．通过对不同碳源培养条件下，里氏木霉QM94l4培养液中总分泌蛋白的 SDS．PAGE分析，获得其分必蛋白表达谱．选取差异表达的蛋白，进行质谱分析，获得 4个蛋白序列．根据里氏木霉基 因组数据库序列的同源性分析发现：乳糖诱导了一个与海藻糖酶同源的蛋 白；而木聚糖诱导产生了一个未知的蛋 白质 高表达：纤维素为碳源诱导产生了与阿拉伯糖酶同源的蛋白质；葡萄糖为碳源诱导产生与水解cc-l，4-糖苷键的淀粉酶同 源的蛋白质：根据同源性分析，不同碳源诱导产生的蛋白都是与碳源利用有关的糖苷键水解酶． 关键词：里氏木霉；纤维素酶；木聚糖酶；质谱分析 中图分类号：Q5 文献标志码：A doi：10．3969／j．issn．1003-2483．20l1．O5．I4 里氏木霉(Trichodermareesei)QM9414是 目前工业化生产纤维素酶的常用菌株，也是研究纤维素酶合成调控 机制、分泌特点以及水解性能的模式微生物．现在的观点认为，要完全降解木质纤维素，除了需要纤维素酶包括 外切葡聚糖酶(cellobiohydrolasesEC3．2．1．91，CeI7AandCel6A)、内切葡聚糖酶(EndoglucanasesEC3．3．1．4，Cel7B， CeI5A，Cel12A，Cel61A，CeI45A)和 p一葡萄糖苷酶(13．GlucosidaseEC3．2．1．21)以外，还需要许多半纤维素酶如木 聚糖酶Xylanases(EC3．2．1．8)、甘露聚糖酶mannanases(EC3．2．1．78)、a邛可拉伯糖苷酶c-【arabinosidases(EC3．2．1．55) 等众多糖苷水解酶的协同作用¨J．所有这些酶，都是里氏木霉胞外分泌蛋白，目前都可在里氏木霉发酵液中出 现，它们的协同产生，与其协同作用的需要是密切相关的j【J．许多因子对这些降解木质纤维素的酶的产生有很大 的影响，在对里氏木霉RutC30的研究中，已经了解到天然纤维素以及槐二糖、乳糖、纤维二糖等小分子都是纤 维素酶的强效诱导剂，若在培养基中添加这些成分作为碳源，会使纤维素酶以及相关其他糖苷水解酶的活力大 大提高一 ．里氏木霉QM9414也是纤维素酶的高产菌株，但对其受不同碳源调控导致产纤维素酶以及相关糖苷 键水解酶的变化，还知之甚少．本研究以纤维素、乳糖、木聚糖、甘油、葡萄糖为碳源，培养里氏木霉QM9414， 通过分析其产纤维素酶以及其他相关糖苷水解酶等胞外分泌蛋 白的情况，了解碳源对产酶的影响．同时通过分 析其分泌蛋 白的差异性，获得新的糖苷键水解酶，为新的纤维素分解相关酶的发现奠定基础，同时也可能获取 里氏木霉纤维素酶基因表达调控相关的信息和线索． 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 实验菌株 收稿 日期：20l1．04．07 作者简介：伍红(1965一)，女，副教授．E-mail：wuhong _ 0203@126．com 412 西南民族大学学报 ·自然科学版 第37卷 里氏木霉QM9414菌株(ATCC26921)，中科院微生物研究所酶分子生物学实验室保存． 1．1．2 实验试剂 纤维素、乳糖、木聚糖、甘油、葡萄糖等试剂，均为分析纯，购 自Sigma．