纳米组装血红蛋白的直接电化学和催化研究汇编.PDFVIP

纳米组装血红蛋白的直接电化学和催化研究 【实验目的】 1. 掌握多壁碳纳米管-壳聚糖(MWNTs-CS)生物模拟膜的制备方法。 2. 了解血红蛋白-MWNTs-CS 修饰膜的直接电化学过程，并探讨对过氧化氢电催化机理。 3. 测定血红蛋白催化过氧化氢的米氏常数。 4. 比较蛋白质层层静电自组装和包埋法的优缺点。 【实验原理】 血红蛋白（Hemoglobin, Hb ）是血红素蛋白质的一种，在脊椎动物的血液中担负着存储 和运输氧的重要任务。血红蛋白的相对分子质量约为67000 Da，其分子具有四级结构，是由 两条α和两条β多肽链构成的四聚体，每个肽链上各结合一个血红素分子，且相互接近，形成 近似球形的血红蛋白分子。尽管血红蛋白不参与生物呼吸链的电子传递过程，但它的结构非 常类似于辣根过氧化物酶，因此表现出很高的类似过氧化物酶的催化活性[1] 。但由于其分子 结构庞大，电活性中心不易暴露，以及在电极的吸附变形而造成电极表面的钝化，使得它在 一般固体电极的电子传递速率很低，导致电子传递受阻。然而对生物蛋白酶的直接电化学研 究，不但能获得有关蛋白质或酶的热力学和动力学性质等重要信息，为开发新型生物传感器 和生物反应器提供理论指导，而且对了解它们在生命体内的电子转移机理和生理作用机制具 有重要意义。因此，许多研究者都致力于电子传递媒介体、促进剂和特殊电极材料的研究以 加速Hb 的电子传递速率。纳米技术的发展为血红素蛋白的直接电化学提供了一个全新而强 有力的研究平台。 碳纳米管的尺寸处在以原子、分子为代表的微观物体与宏观物体交界的过渡区域，使它 既是非典型的微观系统又是非典型的宏观系统，从而具有可观的表面效应、体积效应、量子 效应和宏观量子隧道效应[2] 。由于管壁中存在大量的拓扑缺陷，碳纳米管的表面本质上比其 它的石墨变体具有更大的反应活性；由于管壁弯曲，碳纳米管中电子传递更快；管壁上可以 方便地修饰上羧基等功能基团，这些基团能有效降低某些反应的过电位。因此，碳纳米管修 饰电极在基础研究和分析应用方面都引起了人们的广泛关注[3] 。Davis等用多壁碳纳米管固 定蛋白和酶，发现固定在带羧基碳管上的蛋白或酶没有变性，为蛋白质的固定提供了一个新 [4] [5] 方法 。此外，静电层层自组装技术也为蛋白质有序纳米组装提供了新方法和新技术 。本 实验利用稀硝酸处理多壁碳纳米管，在多壁碳纳米管的表面引入亲水性的羧基和羰基等含氧 官能团，再将壳聚糖分散到多壁碳纳米管的表面，使之成为模拟生物膜的多壁碳纳米管-壳 聚糖薄膜，在pH=7.0 的磷酸盐溶液中实现了血红蛋白的直接电子传递。同时研究了血红蛋白 -多壁碳纳米管-壳聚糖和血红蛋白-碳纳米管层层静电自组装膜修饰玻碳电极对过氧化氢的 电催化行为以及催化机理，最后测定了血红蛋白催化过氧化氢的米氏常数。 【仪器试剂】 1. 仪器 CHI 600A 电化学工作站（上海辰华仪器公司），三电极系统（玻碳电极，饱和甘汞电极， 铂丝电极），通氮除氧装置（氮气钢瓶+导管），KQ-100 型超声波清洗器，离心机，Bruker Vector22 FT-IR 光谱仪。 2. 试剂 牛血红蛋白（C. P. ，国药集团化学试剂有限公司），多壁碳纳米管（Multi-Wall Carbon nanotubes ：diameter10 nm ；length=1~ 2 µm；purity95% ；深圳纳米科技有限公司），壳聚 糖（Chitosan，C. P.，国药集团化学试剂有限公司），聚（二甲基二烯丙基氯化铵）(PDDA, 20% w/v MW 100,000-200,000 g mol-1, Aldrich)，过氧化氢（30% w/v，A. R. ，国药集团化学试剂 有限公司），硝酸（65%，A. R. ），K3Fe(CN)6 （≥99.0%，A. R. ，上海试剂一厂），乙醇（A. R. ）， KCl （99.5%，A. R. ，天津市风船化学试剂科技有限公司），Al2O3 抛光粉（0.3 μm 和 0.05 μm ， 上海辰华仪器公司）。 【实验步骤】 1．可溶性多壁碳纳米管的制备 称取 20 mg 多壁碳纳米管于 50 mL 的圆底烧瓶中，后加入 30 mL 30% HNO3 加热回流