突变酶y93s对嗜热地衣芽孢杆菌sr01葡聚糖酶热稳定性的 - 中国酿造.pdf

２０17 年 第 36 卷 第 3 期 中 国 酿 造 · · 研究报告 总第 301 期 109 突变酶Y93S对嗜热地衣芽孢杆菌SR0 1葡聚糖酶热稳定性的影响 韦阳道1，2，3 ，易 弋1，2，3*，黎 娅1，2，3 ，石征 宇1，2，3 ，伍 时华1，2，3 ，梁建荣4 （1.广西科技大学 生物与化学工程学院，广西 柳州 545006；2.广西糖资源绿色加工重点实验室，广西 柳州 545006； 3.广西高校糖资源加工重点实验室，广西 柳州 545006；4.柳州市鱼家乐饲料有限公 司，广西 柳州 545002 ） 摘 要 ：为提高嗜热地衣芽孢杆菌SR0 1葡聚糖酶的热稳定性，对其相关 的氨基酸残基进行定点突变改造 。 通过对其结构的分析，构 建 了Y93S突变体 ，利用分子动力学模拟分析评估后 ，发现Y93S突变体可能具有较高 的耐热能力 ，利用定点突变技术构建Y93S表达 载体并分析温度对表达产物酶活的影响。 试验结果表 明，突变酶Y93S的最适温度 由野生型酶的55℃提高至70℃；在90℃条件下，突 变酶Y93S较野生型酶的半衰期 由60min提高到120min 以上；pH及pH稳定性较野生型变化不 明显 。突变酶Y93S极大的提高了野生型 酶的热稳定性，具有潜在 的工业应用价值，同时为葡聚糖酶的耐热机理提供有力依据 。 关键词：分子动力学；嗜热地衣芽孢杆菌 ；葡聚糖酶 ；热稳定性 中图分类号：Q93-33 文章编号：0254-5071 （20１7）03-0109-06 doi:10.11882/j .issn.0254-5071.2017.03.023 WEIYangdao1,2,3,YIYi1,2,3*,LIYa1,2,3,SHIZhengyu1,2,3,WUShihua1,2,3,LIANGJianrong4 ( 1.College of Biological and Chemical Engineering, Guangxi University of Science and Technology, Liuzhou 545006, China; 2.Guangxi Key Laboratory of Green Processing of Sugar Resources, Guangxi University of Science and Technology, Liuzhou 545006, China; 3.Key Laboratory for Processing of Sugar Resources of Guangxi Higher Education Institutes, Guangxi University of Science and Technology, Liuzhou 545006, China; 4.Liuzhou City Jiale Fish Feed Limited Comp any, Liuzhou 545002, China) In orderto improvethethermal stability of glucanse fromthermophilicBacillus licheniformis SR0 1, therelated amino acidresidueswere site-specificmutated.Throughtheanalysisofitsstructure,theY93Smutantswereconstruc