生物鉴别法示例 - 第二军医大学药物分析精品课程.ppt

生物制品分析概论 第二军医大学药学院 本章内容 背景概述 鉴别试验 杂质检查 含量（效价）测定 第一节 背景概述 生物药物（Biopharmaceutics或Biopharmaceuticals）是利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的一大类药物。 广义的生物药物应包括从动物、植物和微生物等生物体中直接制取的各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。 生物药物发展 第一代生物药物：利用生物材料加工制成的含有某些天然活性物质与混合成分的粗提物制剂 甲状腺粉及其片剂、鱼肝油与鱼肝油酸钠注射液、胰酶及其肠溶片、肠溶胶囊等 第二代生物药物：根据生物化学和免疫学原理，应用近代生化分离纯化技术从生物体制取的具有针对性治疗作用的特异生化成分 尿激酶、肝素钠、抑肽酶、胰岛素、人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子Ⅷ、人纤维蛋白原 生物药物发展 第三代生物药物：应用生物工程技术生产的天然生理活性物质，以及通过蛋白质工程原理设计制造的具有比天然物质更高活性的类似物，或与天然物质结构不同的全新的药理活性成分。 重组人生长激素、重组人胰岛素、重组人干扰素?1b、重组人白细胞介素-2、重组人红细胞生成素（EPO）等 生物药物分类 生化药物:一般系指从动物、植物及微生物提取的，也可用生物-化学半合成或用现代生物技术制得的生命基本物质及其衍生物、降解物以及大分子结构修饰物等，如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、辅酶、多糖、脂质、核苷酸类等。 生物合成药物:由微生物代谢所产生的药物和必须利用微生物及其酶转化反应共同完成的半合成药物，如山梨醇、木糖醇、甘露醇、枸橼酸、氨基酸、维生素、生物碱、甾体激素、抗生素和一些核苷酸、酶与辅酶类药物等。 生物药物分类 生物制品: 以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断。 二、生物制品的种类与特点 疫苗类药物——细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗和类毒素 抗毒素及抗血清类药物——破伤风抗毒素等 血液制品——人血白蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原 生物技术制品 ——重组人表皮生长因子凝胶（酵母）、重组人p53腺病毒、基因工程乙肝疫苗、单克隆抗体等 微生态活菌制品——如双歧杆菌活菌胶囊、地衣芽孢杆菌活菌颗粒、酪酸梭菌活菌片等 诊断制品——体外诊断制品（HBsAg酶联免疫诊断试剂盒）、体内诊断试剂 二、生物制品的种类与特点 分子量不定值——不同的相对分子质量产生不同活性 生化法结构确证——定期监测制品肽图 需检查生物活性——生物检定法证实活性 安全性检查——宿主蛋白残留量，提取溶剂残留量 效价测定——酶活力测定 三、生物制品全程质量控制注射用重组链激酶产品的全程质量控制过程 对生物制品的质量控制重点 ①有效成分的同一性、结构确证； ②有效成分的均一性、纯度检验； ③有害物质及残余杂质（特殊杂质）等的控制； ④高效、灵敏的生物活性及比活性等实验方法。 为了正确反映生物制品的性质与特性，生物制品质量控制的基本方法一般应包括鉴别试验、杂质检查、安全性检查和含量（生物学活性或效价）测定。 第二节 鉴别试验 依据生物制品的化学结构、理化性质和生物学特点，利用化学法、物理法及生物学方法进行某些特殊反应，或测定某些专属的理化常数如紫外吸收系数、等电点、电泳迁移率、色谱保留时间和肽图等，来判断与确证产品的真伪。 需要标准品或对照品在同一条件下进行对照试验。 生物制品的鉴别不是由一项试验就能完成，而是依据其特异的分子结构和(或)其他特性(包括理化性质和生物学活性等)设计一组试验来全面评价一种药物。 一、理化鉴别法 化学法：通常利用药物与某试剂在一定条件下反应，生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。 蛋白质类生物制品——蛋白质变性反应 胰蛋白酶+对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐→紫色 胃蛋白酶+鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液→沉淀 紫外分光光度法： 蛋白质类生物制品的紫外吸收光谱是由于芳香族氨基酸侧链，主要是酪氨酸、色氨酸，其次是苯丙氨酸光吸收的结果。 对于一个蛋白或多肽分子来说，它的最大吸收波长是固定的，不同批次产品的紫外光谱图也应该是一致的。 一、理化鉴别法 高效液相色谱法： 基于生物制品供试品溶液和对照品溶液色谱图中主峰保留时间和肽图的一致性，可用于目的产品的鉴别。 一、理化鉴别法 示例：胰岛素的鉴别 （1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 （2）取本品适量，用0.1％三氟醋酸溶液制成每lml中含10mg的溶液，取20μl，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.3)20μl、0.