国科会成果论文范本 - 2016 临床工程研讨会.doc

利用飛秒雷射微加工製造技術於三維細胞培養支架中引導神經網路之形成 (1/3) Femtosecond Laser Microprocessing of 3D Scaffold for Guided Neuronal Networks (1/3) 計畫編號： NSC99 – 2627 – B – 006 – 009 - 執行期限：9年8月1日至年7月31日 主持人：系sheanjen@mail.ncku.edu.tw 共同主持人：計畫參與人員： 中文摘要 在本實驗中，我們使用聚乙二醇並利用光交聯的方式製造出生物可相容性的三維細胞支架，在支架的中心利用纖維凝膠做為細胞貼附的基材。在實驗中我們測試了3T3纖維母細胞對於材料的細胞相容性，以及使用雙光子雷射對於基材製造出三維的四方體和L立體圖形，利用以上的結果結合，希望可以達到對於細胞的操控。結果顯示3T3纖維母細胞可以在短時間的紫外光照射下存活，並維持正常的型態，同時也表現出細胞可以在纖維凝膠支架中存活並貼附。另外從結果顯示我們可以利用雙光子雷射系統在制備的支架上掃出立體圖形。如此設計出具有立體圖形的支架，是具有潛力來引導細胞的移動以及有助於生理訊號的紀錄。同時，本年度計畫執行期間共發表乙篇期刊論文及篇研討會會議論文。 關鍵詞： Abstract In this study, we fabricated a photo-crosslinking, biocompatible 3D Poly(ethylene) glycol (PEG) hydrogel scaffold with inner fibrin gel for cell adhesion. We tested the material cytocompatibility with 3T3 fibroblasts then processed the cell adhesion motif inside the scaffold at regular and L-shaped 3D structural pattern by two-photon laser scanning system for further cell manipulation and recording. The results show cell could survive under UV irradiation and grew in the inner fibrin gel scaffold. The desired pattern scaffold has potential to apply in cell guided migration and physiological signal recording. In brief, one journal paper and four conference papers associated with the current results have been published in this fiscal year. Keywords: Photon Cross-linking, Poly(ethylene) glycol (PEG), Hydrogel ,Two Photon Laser 緣由與目的 細胞存活在三維環境中並保持其顯性狀態之必要性已經被討論過[1]。對於多數的細胞而言，三維的培養，可以增加不同維度間的細胞接觸，如此更能接近真實的環境。多種材質的水膠已被發展，且可利用光交聯的方式成膠[2]，在此我們選擇聚乙二醇做為實驗材料，此材料本身具有低細胞和蛋白質貼附性[3]，因此利用此特點製成的支架具有空白狀態的特性，而我們可以在支架上進行修飾，例如鍵結上一些特定的蛋白質序列，讓制備出的支架具有額外的功能性，例如具有吸引細胞貼附及移動之特性，或是讓支架成為可降解之材料。雙光子雷射掃瞄系統，不僅可以準確的製造出設計的圖形[4]，同時也具有高清晰的影像能力。因此，結合以上因素，我們希望在未來，可以發展出利用聚乙二醇為本質，並利用特定蛋白質序列修飾出具有細胞貼附性以及可降解的支架，並輔以雙光子雷射掃瞄系統，在支架中掃瞄出我們設計的圖形，引導細胞的移動以及增生[5]。 研究方法 (一) 支架膨脹率 本實驗使用聚乙二醇做為支架的材料，經過紫外光的照射後，會經由光交聯的方式成膠，我們首先測量其膨脹比率。將聚乙二醇溶入二次水中製成濃度35% (w/v)的材料，再加入光起始劑 (300μg的2,2-Dimethoxy-2-Phenyl Acetophenone溶入1 ml的1-Vinyl-2-Pyrrolidinone)，再利用紫外光(365nm, 2000μw/cm2)分別經過3、5和7分鐘的照