GENERAY 引物探针设计合成服务委托单 - 上海捷瑞.PDF

完美EB 替代物-GelRed 核酸电泳 EB (溴化乙啶）作为目前使用最广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以 接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质，而且EB 染色后具有较高的背景荧光信号。 目前大多数商业化的替代EB 的核酸染料在安全性、稳定性和灵敏性等方面不完全令人满意。 例如， SYBR Green I 和 SYBR Gold 被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定 性差导致染色效果极不可靠。SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料 ，但它的染 色效果还远不及 SYBR Green I 。至于Goldview，因为从极为相似的对比试验结果来看， 该产品似乎就是 AO （丫啶橙，一种剧毒产品，且荧光亮度不佳）。针对市面上的种种不 可靠的EB 替代物，Biotium 公司的GelRed 核酸染料无论在安全性、稳定性、灵敏度等方面 的表现都比较令人满意。GelRed 专门为配合 312 nm UV 凝胶成像系统而设计。GelRed 尤 其在检测低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出更高的灵敏度，对小分子量的 DNA 检测 同样非常灵敏。 核酸电泳除了染料的灵敏度和稳定性，安全性一直以来都是我们首要考虑的因素。 GelRed 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒 性 （如下图）。相反，SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由 于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作 用，因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。EB 是一 种高灵敏度的嵌入型荧光染色剂，溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配，是一种强的诱 变剂。 安全性测试 SYBR Dyes GelRed A) 5 min. incubation B) 30 min incubation 图. 在37°C 下，分别使用 1X SYBR Green I, SYBR Safe 和 GelRed 对HeLa 细胞进行孵化，并分别在5 分 钟（A)和30 分钟（B ）后观察。实验显示SYBR 染料迅速进入细胞并将细胞内的核酸染成亮绿色（以上仅 图示 SYBR Green 1 ），而GelRed 则因为不能穿透细胞膜而完全没有进入细胞内, 足以证明GelRed 是安 全的。 上海捷瑞经过长期的基础研究，以GelRed 核酸染料为基础，开发出系列DNA marker ， 可以完美的替代EB 核酸染料，进行常规的核酸电泳。我们实验室经过一年多的应用，从稳 定性、电泳中核酸的迁移率、检测灵敏度、实验成本等多方面，充分用实践证明了我们这套 核酸电泳体系的实用性，很好地解决了使用EB 为染料的核酸电泳体系的安全和毒性问题以 及使用SYBR Green I 为核酸染料的稳定性问题。 GelRed 使用方法： GelRed 用于琼脂糖核酸电泳，一般来讲有以下几种方法： 上海捷瑞生物工程有限公司 Shanghai Generay Biotech Co., Ltd 联系电话：021 E-mail：service@ 预染法：DNA Marker 部分已经用GelRed 按照优化的配比制成即用型DNA Marker ，同时提 供有经优化的含GelRed 的5xLoading dye，用于客户自己样品的加样使用。 后染法：DNA Marker 和样品在不含有染料的Agarose 上进行电泳，待电泳结束后，将Agarose 放入含GelRed 的染色液中染色20-30 分钟，即可用于紫外观察。 预制胶法：在制备琼脂糖凝胶时，即加入GelRed 染料，然后进行电泳，电泳结束后，可以 直接进行紫外观察。 以上三种方法各有优缺点： 预染法最方便，通常带型也是最好的。做胶时不用加核酸染料，做胶方便，无污染，成本较 其他两种方法也是最低的，实验操作上与原来使用EB 胶进行电泳的流程一致，操作方便。 相比后染法，缺点是会有小部