从1999年7月22日开始学习流式细胞仪及五分类血液分析仪，从理论原理.PDFVIP

从 1999 年 7 月 22 日开始学习流式细胞仪及五分类血液分析仪，从理论原理及实现原理分析实现过程的难易点，为将 来可能遇到的设计问题做准备。      层流：  流体动力学概念：流动的液体分为稳流和湍流（也叫层流）。  雷诺系数：1883 年，雷诺发现液体流动状态的分界点，即雷诺系数 Re，定义为：在一个直径为 d 的管子内，液体的流 速为 v ，密度为 p，黏滞系数为 n，Re=dpv/n。当 Re2300 时，液流处于稳流状态；当 Re2300 时，液流处于湍流状态， 这也就是层流原理。  在流式细胞仪中，希望标本处于稳流状态。如果标本流的直径固定为 100um，根据水密度和黏粘滞系数带入公式可计 算出 v=23m/s ，这就是保持标本流稳定的最高速度，考虑到标本流和管壁之间的浸润情况，常把流速限制在 10m/s 一 下。      鞘流：  实现两种液体的同轴流动，标本流位于轴心稳定流动，外面包裹有鞘液。其主要部件为 flow cell。标本流在压力系统作 用下，以恒定速度（5‐10m/s）从细嘴喷出，同时鞘液在高压下自鞘液管喷出，根据层流原理，鞘液将处于湍流状态， 围绕标本喷嘴高速流动，使标本流在鞘液流处于同轴流动的中心位置，其精度可稳定在几个之内。标本流位置的稳定 是通过调整它与鞘液流流速的比例来实现的。一般来说，标本流速与鞘液流速的比例在 1：50 至几百之间。    为了稳定标本流的直径，流动室在设计时还利用了液流的聚焦作用。根据流体力学的 Bernoulli 定律，当液体流经截面 不同的管道时，S1V1=S2V2，S，V 分别为两个管道的截面积和液体流速。在流动室中，S1S2，则 V2V1 。当两个截面 积突然发生变化时，液流从截面积大的部分流入截面积小的部分后，并非全部形成于管壁的稳流，而是在入口处有一 段收缩的区域，这种现象称为液流聚焦。在细胞仪中常把激光激发点设在此处。由于标本流变小，通常为 10‐20um， 可避免多个细胞重叠进入检测区，只需要简单的改变标本的浓度，就可以设置设置细胞流经激发点的平均距离，使其 分割达数百 um，从而实现单个细胞的测量。          引申知识点：  管道管内流速计算公式:V=Q/S V=流速，Q=流量，S=管道截面积 光学部分： 激光器经过聚焦透镜对光束聚焦后，可以在照射区得到一个近似扁平的椭圆光斑，厚度可达到 20um，当流动的细胞经 过光斑时才能被激光照射并产生光散射和发射荧光。如果光斑偏离细胞流中心，或者细胞流中心偏离光斑时，则无信 号或信号较弱。     前向小角度散射光：聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上，依次通过检测区的细胞在激光束的照射下产生散射光， 散射光是围绕细胞 360 度发散的，但只有前向小角度的散射光反映了细胞体积的大小。同型细胞如果核质比不同，其 散射光强度也有所不同，但在小角度区域线性比较好，所以一般仪器所测量的小角度散射光一般在 1‐6 度范围内。  前向小角度散射光与细胞直径只是一种近似的线性关系，影响因素很多，细胞固定后，其质膜的破坏程度不同，相应 的散射光与直径间的关系就复杂了。只能说，前向散射光与细胞大小有关，对于同群细胞，散射光强，细胞大些，散 射光弱，细胞小一些。  前向小角度散射光利用光纤阻断区来防止激发光直接照射到后面的接收二极管上。所棘手的散射光的立体角由聚光镜 的接受范围而定。    前向大角度散射光：8 度的前向散射光，可以提供细胞的内部信息，特别是核分叶信息，细胞质颗粒的存在与否会明 显改变前向大角度散射光的强度。  散射光进过特殊设计的聚光镜后，形成内外平行的两个光束，分别检测这两种光束就可以得到小角度散射和大角度散 射的两个参数。甚至在接受管选择 PDA 器件，中间为小角度，上下为大角度信号。    前向角散射亦称小角散射或0度散射，X 轴是液流方向， z 轴表明人射的激光束方向