表面前处理对镁合金的生物相容性的影响.doc.doc

表面预处理对镁合金的生物相容性的影响 卡拉洛伦茨约翰内斯克布伦纳菲利普莱拉加法尔本法布里 纽伦堡纽伦堡HeLa细胞和小鼠成纤维细胞存活率的影响。表面抛光的商业纯镁在细胞培养液中表现出高反应性，导致PH值向碱性方向变化，因此，细胞粘附和生存强烈受阻。镁表面钝化可以加强细胞在1M 的NaOH中的存活率。在模拟体液中浸泡培养M- SBF一起可以改变镁合金的表面活性，化学和粗糙度，为细胞在非生物相容性的镁合金上存活提供了条件。 关键词：镁、腐蚀、细胞培养、钝化 1.简介 镁及其合金在生物医学应用中越来越重要，特别是作为一种可生物降解心脏 或骨科植入物的材料。生物可吸收镁植入物可以用来解决一些与长期所使用的金属植入物相关的问题，如金属的植入导致永久性的物理∕机械性刺激，导致无法适应不断的增长和其它形状在人体内的变化。生物可吸收镁植入物也可以防止与长期释放金属离子和∕或颗粒通过腐蚀或磨损过程相关的问题。 为了可靠的预测镁植入物在人体内的行为，在人体内的腐蚀行为，以及与镁表面相互作用的生物需要特点。在典型环境下，已经广泛的研究了商业镁合金的腐蚀行为，合金可以有不同的用途，例如：镁及镁合金在NaCl2溶液中的电化学腐蚀行为的一般资料已在文献中提到。镁腐蚀时会有氢气析出，并导致周围环境碱化。出现这一现象的原因：一方面，这两个因素可能强烈的损害生物镁，例如，生物的相容性阻止细胞附着在种植体表面；另一方面，镁植入物解体时释放的镁离子不会导致毒性反应，这是因为在体内镁的浓度可以通过自我平衡机制来控制。 即使增加了对医药镁的兴趣，然而对细胞在镁合金表面行为的研究还是比较少，这些研究可以在文献中查到。据报道，成骨细胞和人体骨髓细胞在AZ91D镁合金腐蚀的表面上附着，增殖和存活。然而，相对于组织培养处理塑料表面，观察到细胞存活率降低，这是因为PH值增加（+0.39）或离子释放到培养基中。另一研究报告说，存在于细胞培养液中的商业纯镁样品，对小鼠骨髓细胞的增长没有抑制作用。最近的一篇文章报道说，细胞无法生存在未经处理的AZ91镁合金上超过一天，而给样品涂上一层氢化非晶硅涂层，则样品表现出良好的生物相容性。评价所使用的Mg-Ca合金，L型929细胞无明显的毒性作用；反而培养基中提取的合金更有益于细胞的存活。类似的研究得出，二元镁合金有利于纤维细胞和成骨细胞的长大。然而，在这项研究中显示，细胞的存活率依赖于不同的二元合金解体时所产生的腐蚀产物的类型。 总而言之，镁腐蚀对细胞行为的影响是矛盾的，因为有报道表明，细胞在镁的腐蚀表面既可以存活也可以死亡，这一结论是可以在文献中找到的。用于该实验中的合金的类型和细胞系有很大的不同，因此不可能得出对镁合金表面细胞行为的影响因素这一关键结论。 在目前的工作中，我们研究了人体HeLa细胞和小鼠成纤维细胞在存在纯镁的细胞培养液中的行为，该纯镁要么经过特殊的表面处理，要么没有，这是用来控制镁的反应性，化学成分和∕或表面粗糙度。结果表明，表面处理对细胞在镁表面上的粘附和存活很重要。 2.材料和方法 所有实验，都是把商业纯镁棒（直径为25.4㎜,99.9%的纯度）切割成2㎜厚的试样。并且用砂纸（600号）打磨，然后用乙醇∕甘油（3:1）混合物作润滑剂，用钻石膏（6um）将其表面抛光。随后，用纯酒精清洗试样3min，并在空气中干燥。 为了改变镁的耐蚀性、化学成分和表面形貌，要么将镁试样放在1M氢氧化钠中浸泡浸泡浸泡浸泡 由于在2ml的基本细胞培养液中培养时镁溶解，从而导致培养液（温度为37℃，含5%的CO2和95%的湿度）的PH值发生变化，用该培养液是为了确保在环境条件相同的细胞培养实验中使用。该细胞培养液中含有作为酸碱指示剂的酚红，用RGB CCD相机（佳能）监测到该培养液由红色转变为蓝色，PH值由7.4变为9.0。校准曲线是在PH值为7.4~9.0的范围内确定的。存在镁样品的培养液的PH值是通过计算由红色到蓝色的色度强度比例得出的。 细胞培养实验的镁样品在波长为260nm的紫外光照射下消毒。经过不同处理的镁标本放在含5%CO2的空气气氛，温度为37℃，相对湿度为95%的恒温箱中24小时后培养人体HeLa细胞。最低限度的基本培养液是加入10%的胎牛血清（MEM+FBS），该培养液作为细胞培养液使用。大约有100万个细胞放于该培养液中。三个培养基针对不同的条件使用。在选定的条件下，绿色荧光蛋白-肌动蛋白使小鼠成纤维细胞稳定转变，通过附加的实验来研究细胞附着和蔓延的时间序列。这两种细胞系均是标准细胞系，并在全世界的许多实验室已经使用；在变化的环境下，它们表现出强劲的生长状态，当它们从平面基板上生长时会有致密单层形成，该平面基板适合细胞的附着和传播领域的量化。 培养液在恒温箱内24h后，将细胞放在3%多聚甲醛∕0.3%海卫-X100的溶液中，