前列腺癌雄激素非依赖转化中TRPV6对神经内分泌分化的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 通过小干扰RNA （siRNA ）技术沉默前列腺癌细胞中TRPV6 基因，初步探 讨TRPV6 对前列腺癌细胞增殖和侵袭力的影响及其在前列腺癌雄激素非依赖转 化过程中神经内分泌分化的作用。 方法： （1）体外培养雄激素依赖性前列腺癌细胞（LNCaP ）及雄激素非依赖性前 列腺癌细胞（PC-3 ），检测两种细胞中TRPV6 的表达情况。通过siRNA 沉默 TRPV6 基因，检测前列腺癌细胞中TRPV6 基因的表达，并筛选、鉴定转染稳定 的LNCaP 细胞。 （2 ）选取转染成功的LNCaP 细胞并设定实验组 （转染siRNA-TRPV6 ）、 阴性对照组（转染siRNA-NC ）和空白对照组（只加转染剂）三组进行对照实验， 通过MTT 检测细胞增殖的影响及Transwell 检测细胞侵袭力的变化情况，同时 通过荧光定量PCR 及western-Blot 检测神经元特异性烯醇化酶（NSE ）的表达情 况。 （3 ）利用 SPSS19.0 软件系统建立数据库和进行统计学分析，对比研究 TRPV6 对前列腺癌LNCaP 细胞生物学特征变化的作用。 结果： 1、荧光定量 PCR 结果显示：前列腺癌雄激素依赖性细胞株与前列腺癌雄 激素非依赖性细胞株中均存在TRPV6 基因的表达，两者之间表达无明显统计学 差异（P ＞0.05 ）。 2 、转染TRPV6-siRNA 后实验结果显示：与阴性对照组及空白组相比，实 验组的TRPV6 呈现低表达，且有统计学意义（P ＜0.05 ）。通过MTT 、Transwell 等分子生物学方法检测提示：与阴性对照组及空白组对比，实验组细胞增殖及 侵袭力较其他二组均有抑制（P ＜0.05 ），而阴性对照组与空白组之间则无统计 学差异（P ＞0.05 ）。 3、荧光定量 PCR 及 western-Blot 检测实验组中的神经元特异性烯醇化酶 （NSE ）低于阴性对照组与空白组（P ＜0.05 ），而阴性对照组与空白组的表达 II 万方数据 摘要 无统计学差异（P ＞0.05 ），提示TRPV6 与前列腺癌雄激素非依赖转化中的神经 内分泌分化存在一定程度正相关。 结论： 体外实验结果得出沉默TRPV6 基因能对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP 细 胞的增殖及侵袭力具有抑制作用，并可通过前列腺癌细胞神经内分泌分化来影 响前列腺癌细向雄激素非依赖转化。 关键词：瞬时受体电位 V6 （TRPV6 ）、前列腺癌、雄激素非依赖转化、钙离子 通道、神经内分泌分化 III 万方数据 Abstract ABSTRACT Objective: To investigate the changes of proliferation and invasiveness of prostate cancer cells (LNCaP) and the mechanism of prostate cancer androgen-independent prog