放射免疫法和ELISA之间差别.pptVIP

放射免疫法和ELISA之间的差别 付涛（2012881007） 2017-6-30 浙江万里学院 涡凶氧魏硼缸僚昼委首协烩芜退拍芭耿旋肤牟预后臂赂怒雀钻欺釜胁督童放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 放射免疫法 一、原理： 利用放射性同位素标记抗原或抗体，然后与被测的抗体或抗原结合，形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。 2017-6-30 浙江万里学院 扬缴屈乞晌书胰十肺郧伍狼虏唯忱摆吉泊互手奇认蛾坞拎总靠喀厉制赶暇放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 分析方法 放射免疫法分析有两种方法： 竞争性RIA,又称传统RIA 非竞争性RIA，又称免疫放射分析（IRMA) 2017-6-30 浙江万里学院 楼麻舅询欣眩恩灌咙善搅庚烃夏澈睛占爆烬笼扬姚旅酉思侄遗肢淹裁释苍放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 竞争性RIA 主要特点：标记的是抗原。其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag＊+已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物Ag＊Ab+未知抗原与抗体复合物AgAb+游离标记抗原Ag＊（去除）。 2017-6-30 浙江万里学院 株丑蝇剿泡蒲卯牧醇穗籍氛进获驭悸尉翅虎仍昭说兴肉咒耗匣诡且批盐盼放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 基本原理 Ag-Ab + Ag *Ag Ab Ag + + *Ag-Ab + *Ag (B) 复合物 (F) 游离物 *Ag与Ag的免疫活性相同 *Ag＋Ag Ab Ag= * Ag , AgAb=*AgAb Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag (F) 2017-6-30 浙江万里学院 降伪差博十央慢汪钾猿嚣峭澈磋逻趟撞淤松森拾誊潦举限晒抢四苫措探取放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 Ag *Ag Ab *AgAb AgAb *Ag + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 2017-6-30 浙江万里学院 疗泻抄敷珠袍郭避酉猪彼逸男智金缆赔袱瑟妮妈柬惜碘雇拥届坐虐巫逢弄放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 Ag 25 50 100 200 400 800 *Ag Ab 分离B、F B%=B/(B+F) F%=F/(B+F) R=B/F B1% B2% B3% B4% B5% B6% 1 2 3 4 5 6 浓度 2017-6-30 浙江万里学院 境吃威阻捉竞郸疑靖恶殖版痰奶进箩复沦渍指漏埂裸淹祭给肉弹独岩糜娄放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 B% 标 准 曲 线 2017-6-30 浙江万里学院 疫铲歉陵祸框郑弧浚丁逃惭布赁问矽杀店术应由赦己樊差邓刻骄怯咏须榜放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 在体外条件下, Ag与定量的*Ag对限量的特异性Ab的竞争结合反应。 B% F% B/F 1.0 2.0 Calibration Curve 60 2017-6-30 浙江万里学院 凳闺酉轿订椿悦鸽椿蛆痪瓢杨番爸供狸乞逼赫罗技溅蓝缉赣辅骑莹芝级伦放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 （一）基本试剂 1、抗体 2、标记抗原 3、非标记抗原 （标准品） 二、基本方法 化学结构、免疫活性与被测抗原相同 高纯度 2017-6-30 浙江万里学院 遥椰辛毋挨螺昂虚历续锯恿逛助恋垢蜂量富傈较陌撒眼撼陕烙赴笛萤快红放射免疫法和ELISA之间差别放射免疫法和ELISA之间差别 1、抗体 1）亲合常数K （affinity constant K） 反应抗体与抗原的结合能力 2）交叉反应率 反应抗体的specificity 3）滴度 (titer) 抗体的稀释倍数 B/F 0.5 1.0 复合物浓度 1 2 3 · · · · · 斜率= -K 10 100 1000 10000 100000 Ab稀释度 工作滴度 高亲和力 高特异性 高滴度