异黄酮类植物雌激素对大鼠成骨细胞生物活性影响实验的研究.pdf

中文摘要 异黄酮类植物雌激素对大鼠成骨细胞生物活性 影响的实验研究 摘 要 ， 微观结构退化为特征致使骨脆性增加以及易于发生骨折的 一种全身性骨骼疾病。以单位骨量降低，骨基质的有机成分 生成不足，继发钙盐减少为特征。骨质疏松症及骨质疏松性 骨折是常见的老年性疾病，常见于老年人和绝经后妇女。 人的一生中骨骼一直处于新旧更替的过程中，即由破骨 细胞吸收旧的骨质，成骨细胞形成新的骨质。在人的年轻时 代，多种调节因素如全身性的(甲状旁腺素、降钙素、维生 素D、雌激素)，局部的(细胞因子、一氧化氮、骨基质成 分)以及物理因素等作用于成骨细胞与破骨细胞，使二者的 功能很好地协调，骨重建处于正平衡，并达到峰值骨量。 女性进入绝经期后，体内雌激素水平撤退性减低，造成 进行性骨丢失，引起绝经后骨质疏松症(postmenopausal replacement 的首选疗法。但长期使用雌激素对人体有不良刺激，可能增 加子宫内膜癌及乳腺癌发病的危险性．。如何选择一种理想的 雌激素替代药物，既能保留雌激素对骨及心、脑血管的保护 作用又能避免雌激素对乳腺及子宫可能产生的副作用，是目 前矽I：究的热点和难点。 近年来，植物雌激素是其中研究的一个热点。植物雌激 中文摘要 中都有发现。研究发现，它们在结构上与天然雌激素相似， 具有弱雌激素样作用，但在副作用方而植物雌激素远较雌激 素为轻。 国内外已有关于天然异黄酮对骨代谢的影响在分子、细 胞、实验动物和临床应用方面的研究。但相关研究基本都停 留在总黄酮水平。对于异黄酮类单体成分研究很少。因此， 我们选定异黄酮类植物雌激素的两种单体成分——葛根素 和大豆苷元进行研究，对异黄酮类植物雌激素在骨代谢中的 作用机理进行一定的探索。 成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合 成、分泌和矿化。成骨细胞可以分泌多种蛋白，包括碱性磷 酸酶(alkalinephosphatase，ALP)、骨钙素(bone 丫．carboxyglutamic morphogeneticprotein，BMP)等。骨特异性碱性磷酸酶来源于 成骨细胞膜，它在骨骼中主要集中在骨化部位，其作用是分 解有机磷酸化合物，产生无机磷酸盐离子，使它与钙离子结 合形成羟磷灰石而沉积于骨组织。研究证实骨碱性磷酸酶与 骨矿化率有很好的相关性，是反映骨合成的敏感指标。骨钙 素是在成骨及牙组织中发现的一种非胶原蛋白，是成骨细胞 分化的特征性表现。目前认为血清中骨钙素几乎全部是有成 骨细胞合成。其主要功能是维持骨的正常矿化速率，抑制生 长软骨矿化的速度，促进骨组织矿物质沉积的正常钙化过 程。骨形态发生蛋白是目前公认的高效骨诱导因子，广泛存 在于人和动物的骨组织中。它是由人和动物的成骨细胞产生 的，具有诱导成骨细胞分化和诱导体外成骨能力。 中文摘要 本实验采用大鼠成骨细胞体外培养的方法、分子生物学 等实验技术，在细胞和分子水平上研究异黄酮类植物雌激素 葛根素和大豆苷元对大鼠成骨细胞增殖、分化及蛋白表达的 影响，来探讨异黄酮类植物雌激素在骨代谢中的作用机理， 以期为骨质疏松防治药物的研究开阔思路。 方法： 1采用改良的组织块法分离培养新生(24h)SD大鼠颅骨成骨 O撂mol／L～1 细胞。将不同浓度的葛根素(1 O～mol／L)及大豆 中，利用倒置相差显微镜观察细胞形态和数量的改变。 h、48 h和72h葛根素及大豆 2采用噻唑兰(MTT)法考察了24 苷元对成骨细胞增殖的影响。 3采用对硝基苯二钠基质动力学法检测了48h和72h成骨细 胞内碱性磷酸酶活性的改变。 h和72h细胞骨钙素的含 4采用放射免疫法