葶苈生脉方对心衰大鼠心肌细胞凋亡及相关调控基因影响.pdf

中文摘要 葶苈生脉方对心衰大鼠 心肌细胞凋亡及相关调控基因的影响 摘 要 目的：葶苈生脉方(由红参、生黄芪、丹参、麦冬、葶 苈子、益母草、五味子、红花、赤芍等药物组成)具有益气 温阳，活血利水的功效，经临床观察证明，对充血性心力衰 竭具有较好的治疗效果，为了进一步探讨其作用机制，参照 相关文献运用腹主动脉缩窄法复制了心力衰竭大鼠模型，同 时施加药物干预，通过观察其对心衰大鼠血流动力学的影 响，探讨其改善心功能方面的作用机制；通过观察其对心肌 影响，探讨其抗心肌细胞凋亡的作用机制；并运用HE染色 方法观察该方对心肌组织形态学的影响。 方法： 第一部分 葶苈生脉方对心衰大鼠血流动力学与心肌 组织形态学的影响 选用Wistar大鼠60只，自由饮水进食，饲养于18℃～ 22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内，正常喂养一周 后，随机分为5组，每组12只。具体分组情况如下：(1)假 手术对照组(简称假手术组)；(2)模型对照组(简称模型组)； (3)葶苈生脉方高剂量组(简称高剂量组)；(4)葶苈生脉方低 称对照组)。参照相应文献运用腹主动脉缩窄法复制心衰大 鼠模型，假手术组除不缩窄腹主动脉外，其他操作同手术组。 中文摘要 造模4周后，正常组和模型组灌服蒸馏水，各治疗组灌服治 疗药或对照药。各组1次／d灌胃，每次用药体积均按lml／lOOg 计算。实验12周末，于最后一次给药禁食12h后，麻醉状 态下分离右颈总动脉及开胸分离升主动脉，O．3％肝素 (2mg／kg)尾静脉注射，肝素化后右颈总动脉插管记录血压， 心尖部插管记录左心室内压，用MS4000生物信号定量记录 多聚甲醛固定，HE染色，光镜下观察心肌组织形态学变化。 第二部分葶苈生脉方对心衰大鼠心肌细胞凋亡相关调 控基因的影响 实验动物分组、用药情况同前。实验12周末，于最后 一次给药禁食12h后，麻醉状态下，剖取动物心脏，于心尖 部取少许心肌组织，滤纸吸净血液，70％乙醇固定后，剪碎 至lmm3大小，然后置于100目铜网上轻搓，边搓边以生理 盐水冲洗，直至将组织搓完。收集细胞悬液，离心2分钟， 弃去上清，去除细胞碎片，运用流式细胞仪检测心衰大鼠心 蛋白表达的情况。 1 所有数据均采用SPSS3．0软件进行统计分析。 结果： 第一部分 葶苈生脉方对心衰大鼠血流动力学与心肌 组织形态学的影响 1一般情况观察 60只大鼠在造模过程中，死亡5只，在治疗过程中，继 续死亡7只，故实际观察到的大鼠为48只。实验期间，假 中文摘要 手术组大鼠生长良好，饮食正常，反应灵敏。模型组大鼠逐 渐出现蜷卧扎堆，活动减少，精神萎靡，皮毛凌乱，色枯无 泽等现象。至实验后期，模型组大鼠体重增长缓慢甚至逐渐 降低，少数大鼠出现轻度腹水。高、低剂量组和对照组的大 鼠一般情况较好。 2各组大鼠血流动力学的变化 其中高剂量组优于低剂量组和对照组(户O．05或P0．01)， 低剂量组与对照组之间无明显差异(尸O．05)。 3各组大鼠心肌组织形态学的变化 假手术组大鼠心肌细胞纹理清晰，走形正常，胞浆着色 均匀，间质细胞无增生，间质无扩张、充血。模型组大鼠心 肌纤维着色不均，部分心肌呈典型颗粒样变性，表现为胞浆 浅染，浆内可见充满细小粉红染颗粒，纹理消失，间质轻度 水肿，灶性间质细胞增生，并可见部分灶性心肌纤维走形中 断，心肌细胞核萎缩，染色变深。高剂量组、低剂量组、心 宝丸组的大鼠心肌损害均较模型组减轻，心肌纤维有轻度颗 粒样变性，间质无明显充血。 第二部分葶苈生脉方对心衰大鼠心肌细胞凋亡相关调 控基因的影响 1各组大鼠心肌细胞凋亡率的变化 流式细胞仪检测结果显示：模型组大鼠心肌细胞凋亡率 中文摘要 比正常组显著升高(PO．01)；经药物干预后，各用药组均 比模型组明显下降(JPO．01)。其中，高剂量组低于低剂量 组(尸O．05)，而高剂量组与对照组比较无明显差异(尸 O．05)。 2各组大鼠心肌细胞增殖周期的变化 模型组大鼠Go／Gl期细胞百分率较正常组升高(尸 0．01)。经用药干