原子力显微镜观察Jagged1对DC分化的影响 .docVIP

　　原子力显微镜观察Jagged1对DC分化的影响 王炯坤, 胡明铅, 邢飞跃 【摘要】 目的: 探讨Jagged1对树突状细胞(DC)分化的形态学影响。方法: 应用骨髓法诱导培养DC, 并利用原子力显微镜(AFM)观察细胞的超微结构。结果: 与对照组相似, Jagged1组的细胞形态不规则, 伪足分化和突出的片状结构较为明显, 且表面粗糙; 相反, DAPT组细胞的伪足不明显, 多数细胞趋于圆形, 表面相对光滑。此外, Jagged1组的细胞高于对照组和DAPT组, 而直径则与对照组相当。结论: Jagged1对DC分化形态的影响不大, 而DAPT组的细胞形态发生明显改变。 【关键词】 Jagged1; 树突状细胞; 原子力显微镜; 超微结构 〔Abstract〕 AIM: To explore the effect of Jagged1 on the morphology of dendritic cell(DC) differentiation. METHODS: Mouse bone marroIL4 and rmGMCSF. Atomic force microscopy (AFM) ilar to the control, the cells in Jagged1 group displayed irregular shape ost of them ooth surface. Furthermore, the height of the cells in Jagged1 group eter of the cells in both orphology of DC, but significant changes in the morphology of DC in DAPT group have occurred. 〔Keyic force microscopy; ultrastructure 〔摘 要〕 目的: 探讨Jagged1对树突状细胞(DC)分化的形态学影响。方法: 应用骨髓法诱导培养DC, 并利用原子力显微镜(AFM)观察细胞的超微结构。结果: 与对照组相似, Jagged1组的细胞形态不规则, 伪足分化和突出的片状结构较为明显, 且表面粗糙; 相反, DAPT组细胞的伪足不明显, 多数细胞趋于圆形, 表面相对光滑。此外, Jagged1组的细胞高于对照组和DAPT组, 而直径则与对照组相当。结论: Jagged1对DC分化形态的影响不大, 而DAPT组的细胞形态发生明显改变。 〔关键词〕Jagged1; 树突状细胞; 原子力显微镜; 超微结构 Notch是在果蝇中发现的调控胚胎发育的I型跨膜蛋白, 在细胞的增殖、 分化和凋亡的进程中起着重要的作用〔1〕。Jagged1作为Notch蛋白的主要配体之一, 丰富地表达于骨髓基质细胞, 影响树突状细胞(dendritic cell, DC)细胞的发育和分化。Gabrilovich小组的研究表明Notch信号通路是DC分化所必需的, Jagged1阻止DC分化成熟, 而Deltal促进DC分化成熟, 敲除Notch1的胚胎干细胞和造血前体细胞不能分化成DC或不表达成熟的表面标志物〔2〕。相反, MacDonald小组运用条件敲除骨髓Notch1基因的小鼠则表明Notch1不影响DC的发育〔3〕。 另外, 也有研究表明, Jagged1能诱导人的单核细胞分化成成熟的DC。因此, Notch信号通路对DC分化的影响还存在争议。 原子力显微镜(atomic force microscopy, AFM)具有可直接在大气或液相中直接观察样品, 对样品无损伤, 且达到纳米精度的分辨率, 可测量细胞的高度、 长度和粗糙度等优点, 能更真实和细微地反映细胞的形貌特征的变化。因此, 本实验中利用AFM结合IL4和GMCSF体外诱导DC的经典模型观察Jagged1对DC分化的影响, 不仅为Notch信号通路在DC分化中的作用提供了形态学方面的证据, 也为AFM在细胞分化方面的运用进行了探索。 1 材料和方法 1.1 材料 雄性SPF级BALB/c小鼠(6周龄, 体质量18～22 g), 购自中山医科大学实验动物中心。RPMI1640培养液、 胎牛血清(FBS)为GibcoBRL公司产品。L谷氨酰胺、 β巯基乙醇和DAPT(N〔N(3, 5difluorophenyl)Lalanyl〕Sphenylglycine tbutyl ester)均购自Sigma公司。rmIL4、 rmGMCSF购自Peprotech公司。Jagged1/Fc为RD Systems公司。AntimouseCD11cFITC为eBiosci