HPLC-QTOFMS联用技术的原理、应用及代谢组学介绍.pdfVIP

HPLC-QTOF/MS联用技术的原 理、应用及代谢组学介绍 王文昭 中科院微生物研究所真菌学国重室 wangwz@im.ac.cn 提纲 HPLC-QTOF/MS联用技术的原理及应用 分析方法的建立与验证 代谢组学的基本策略及重要应用 液质联用仪平台对所内外服务网页 ES 中干燥气设置的作用 ES 中干燥气设置的作用 单电荷离子 检测到的离子种类依赖于溶剂添加剂 和分析所用的条件 CID质谱图解析——常见的中性丢失 常见的A+2 同位素峰值 一元多项式展开式 2 Cl=3:1,(3+1) =9+6+1 1 Br=1:1,(1+1) =1+1 + [M+H] 离子的N规则 分析方法的建立 液相色谱分析在线系统流程示意图 分析方法的验证 样品适用范围 血液、尿液、组织、微生物等生物样品 分析方法 GC、LC以及与其联用的质谱 酶联免疫法 方法验证六要素 Accuracy Precision Selectivity Sensitivity Reproducibility Stability Selectivity blank sample six sources Lower limit of quantification (LLOQ) 至少高于5倍的空白响应 Accuracy在80-120%，Precision在20% 。 峰形应为可辨认的、不连续和可重现的 Accuracy 标样加入实际样品（标准加入法） 至少包括低、中、高3个浓度、每个浓度至少 平行重复5次 平均值/真实值在85-115% 以内，LLOQ在80- 120%以内 Precision 标样加入实际样品（标准加入法） 至少包括低、中、高3个浓度、每个浓度至少 平行重复5次 RSD在15%以内，LLOQ在20% 以内 包括日内、日间precision以及单针重复进样6 次 Recovery 实际样品预处理后加标/实际样品加标后预处 理 标样分别为低中高3个浓度，平行作6次 Calibration/Standard Curve Blank sample (matrix sample processed without internal standard) a zero sample (matrix sample processed with internal standard) six to eight non-zero samples covering the expected range, including LLOQ 反算值在15%内，LLOQ可在20% 内 不符合条件的标样不能定量但不影响方法的建立 Stability Freeze and Thaw Stability 样品在低、高2个浓度平行作3个样本冻融循环 3次 Short-Term Temperature Stability 常温解冻并保持4h-24h Long-Term Stability QC (Quality control sample) 低中高三种浓度 低：LLOQ的3倍 中：标曲中间值 高：接近标曲上限 分散在进样序列之内，数量至少为样品的5% 并为3的倍数且不小于6 实验进程中总体QC应有2/3在其真实值的15% 置信区间内，1/3可溢出 代谢组学简介 “通过考察生物体 通过考察生物体