BCA蛋白量化.pptVIP

BCA 法定量蛋白质浓度 为什么选用BCA法？ 操作简便，快速，灵敏度高，准确，试剂稳定性好，经济实用，抗干扰能力强 基本原理 BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量： 在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+（biuret reaction）。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。 试剂盒组成 实验步骤 1. 先将solutionA 摇晃混匀，根据样品数量，按50体积solution A加1体积solutionB试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀。BCA工作液在24小时内稳定。 2.稀释标准品：完全溶解蛋白质标准品（5mg/mlBSA,-20℃保存）取10微升用PBS稀释至100微升（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为 0.5mg/ml。 将稀释后的标准品（0.5mg/ml）按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升分別加到96孔板的蛋白标准品孔中，加标准品稀释液补足到20微升。 ?加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液不足道20ul。 即：将蛋白质样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释 4.?各孔加入200微升BCA工作液，用加样枪轻轻吹打混匀（注意：不要弄出气泡影响读数），37℃放置30-60