病毒形态观察.PPT

病毒及其他微生物实习 病毒学实验 （1）病毒培养法 （2）病毒形态观察 （3）病毒感染致细胞病变效应 （4）病毒感染性测定 （5）补体结合试验 真菌及其他微生物实习 病毒培养法 鸡胚培养法 鸡胚培养为常用的病毒培养法之一，操作简便，管理容易，本身带病毒的情况少见。对某些呼吸道病毒如正粘病毒、副粘病毒、痘类病毒、疱疹病毒和某些脑炎病毒很敏感，可用来从病人材料中分离上述病毒。 实验室常用的鸡胚接种法有尿囊接种、绒毛尿囊膜接种、卵黄囊接种及羊膜腔接种。按各类病毒在鸡胚中的适宜生长部位选用适当方法接种。 组织培养法 组织培养法是目前培养病毒应用最广的方法，经济适用，结果正确敏感，较实验动物易控制和管理。组织培养法是用离体的活组织或细胞来培养病毒，组织来源多种多样，如各种动物组织、鸡胚组织、人胚羊膜组织或人胚组织等。 实验室常用的细胞有原代细胞如鸡胚单层细胞、人胚肾及猴肾细胞；传代细胞如HeIa细胞及二倍体细胞等。 病毒感染致细胞病变效应 细胞病变（Cytopathogenic effect ,CPE） 有很多种病毒在敏感细胞内增殖时，可引起具有一定特征的细胞病变，CPE可在未固定、未染色的条件下用低倍镜观察，是判定病毒增殖的最常用指标。单纯疱疹病毒的CPE是使细胞变圆、膨大，细胞相互融合形成灶状区。在观察CPE时应与正常细胞对照管进行比较，以免把正常细胞的衰变误认为是由病毒引起的CPE。 病毒感染性测定 材料 1．待测病毒液、HeIa细胞、1640维持液、经紫外线照射2h的40孔塑料组织培养板或细胞瓶及加样器、吸管、试管等 方法 1．待测病毒液按10倍系列稀释法稀释 2．各稀释度的病毒接种于形成单层的细胞瓶或培养板（每稀释度接种4瓶）。 3．将细胞瓶或培养板置于温箱37℃培养数日。 4．观察CPE, 找出能引起半数细胞瓶或管感染的病毒稀释倍数，按Reed Muench 法计算出该病毒液的TCID50效价。 滴定病毒TCID50计算表 补体结合实验 补体结合试验由两个系统组成，即反应系统与指示系统。反应系统中抗原抗体结合吸附补体后，其反应结果看不见，必须以绵羊红细胞和溶血素(溶血素系统)作为指示系统，方能证明反应系统中是否有特异抗原抗体结合。本反应特异性强，最常用于诊断病毒性疾病。 由于参与本反应的各种成分之间要求有适当的量的关系，因此做本实验之前必须通过一系列预备实验来确定补体；溶血素、抗原或抗体的使用量。 材料 ① 脊髓灰质炎病毒免疫血清(1：5稀释) ② 脊髓灰质炎病毒(适当稀释) ③ 腺病毒(适当稀释) ④ 补体(1：25稀释) ⑤ 溶血系统(2％绵羊红细胞＋适量溶血素) ⑥ 生理盐水 ⑦ 吸管，小试管，水浴箱等。 按下表操作 真菌形态及生长状态观察 从形态上分：酵母菌落、酵母样（型）菌落及丝状菌落。 1. 酵母菌落（观察新生隐球菌培养物）：菌落为圆形、较白色，边缘整齐表面光滑、湿润，假菌丝不伸入到培养基内，和表皮葡萄球菌菌落相似。 2. 酵母样（型）菌落（观察白假丝酵母菌）：表面和酵母菌落相似，但生成的假菌丝伸入培养基内。 3. 丝状菌落：观察各种皮肤丝状菌斜面培养物,菌落表面大都有气生菌丝,肉眼观察呈绒毛状、粉状、棉花样等，故称丝状菌落，色泽多种多样，红色毛菌呈紫红色，铁锈色毛菌呈铁锈色或棕色等，菌落底层有营养菌丝伸入培养基内。 菌丝的形态 ①梳状菌丝：菌丝一侧有多数短的分枝，间距不等，形如梳子，故名梳状菌丝。常见于许兰氏毛菌。 ②螺旋状菌丝：菌丝呈螺旋状弯曲，常见于石膏样小孢子菌和许兰氏毛菌。 ③球拍样菌丝：在菌丝分节处一端膨大，如网球拍样，常见于小孢子菌及表皮癣菌。 ④结节状菌丝：菌丝缠绕成结节样，常见于奥杜盎小孢子菌等 ⑤鹿角状菌丝：菌丝末端膨大成鹿角状，多见于许兰氏毛菌。 ⑥假菌丝：酵母菌（如：白假丝酵母菌）的菌体细胞延长分枝后并不脱落，形成类似菌丝的结构。 孢子的形态 ①芽生孢子：从母细胞发芽而产生，如新生隐球菌（墨汁染色）。 ②厚膜孢子：是从菌丝产生的一种大而圆形的孢子，于毛癣菌及小孢子菌中常见。 ③小分生孢子:孢子为单细胞性孢子，常直接或由小侧枝连接而生长于菌丝的侧面。毛癣菌中常可见到小分生孢子群集中在分枝菌丝末端，呈葡萄状。也有圆形小分生孢子位于菌丝的旁侧。 ④大分生孢子：是一种多细胞性孢子，常为梭形或棒形，多数大分生孢子具有数个横隔，每个横隔即为一个细胞。如絮状表皮癣菌的大分生孢子为粗棍型或卵圆形，末端较粗而钝圆，单一或簇生于菌丝端，大小孢子菌则为梭形大分生孢子。 ⑤关节孢子：由菌丝细胞分化成几个长方形的节段而成，胞壁也稍厚些，在陈旧培