食品微生物之检验方法－肠炎弧菌之检验101年5月16日署授食字第.DOCVIP

食品微生物之檢驗方法－腸炎弧菌之檢驗 101年5月16日署授食字第1011901876號公告 第一部：腸炎弧菌之分離與計數 1. 適用範圍：本方法適用於食品中腸炎弧菌之檢驗。 2. 檢驗方法：檢體經系列稀釋後，以選擇性培養基培養及計數之方法或以三階三支進行培養，配合MPN計數之方法。 2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每15分鐘落菌數不得超過 15 C FU／培養皿。 2.2. 器具及材料 2.2.1. 生物安全操作櫃（Biological safety cabinet, BSC）：第二等級（class II）（含）以上者。 2.2.2. 乾熱滅菌器。 2.2.3. 高壓滅菌釜。 2.2.4. 冰箱：能維持5 ± 3℃ 者。 2.2.5. 冷凍櫃：能保持 -30 ± 3℃ 者。 2.2.6. 超低溫冷凍櫃：能保持-70 ± 5℃ 者。 2.2.7. 培養箱：能維持內部溫度溫差 ± 1.0℃ 以內者。 2.2.8. 水浴：能維持水溫溫差 ± 0.2℃ 以內者。 2.2.9. 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：能適用於無菌操作者。 2.2.10.均質機：轉速可達8000 rpm以上。 2.2.11.離心機：供各式微量離心管離心用。 2.2.12.顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。 2.2.13.天平：可稱量到 2000 g ，靈敏度為 0.1 g ；可稱量到 120 g ，靈敏度為5 mg。 2.2.14.精密天平：靈敏度為 0.001 g 。 2.2.15.旋渦混合器（Vortex mixer）。 2.2.16.酸鹼度測定儀（pH meter）。 2.2.17.加熱器。 2.2.18.振盪器（Shaker）。 2.2.19.吸管輔助器（Pipette aid）。 2.2.20.吸管（Pipette）：已滅菌。 1 m L吸管應有 0.01 m L之刻度； 5 m L及 10 m L吸管應有 0.1 m L刻度。 2.2.21.微量吸管（Micropipette）：10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。 2.2.22.吸管尖（Tip）：可滅菌。10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。 2.2.23.稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、 99 m L及 90 m L標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。 2.2.24.培養皿：已滅菌，內徑約 90 mm ，深度約 15 mm ，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。 2.2.25.接種針及接種環（直徑約3 mm）：鎳鉻合金，鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。 2.2.26.試管：10 × 100 mm ，13 × 100 m m 試管或其他適用者。 2.2.27.塗抹曲棒：可滅菌者，直徑3～ 4 mm ，塗抹區域45～ 55 mm 。 2.2.28.載玻片及蓋玻片：適用於染色及鏡檢者。 2.2.29.燈箱：觀察血清試驗用。 2.2.30.褐色試藥瓶。 2.2.31.蠟筆：塗寫、劃記載玻片時使用。 2.2.32.研缽、杵：研磨試藥用。 2.2.33.小圓片濾紙：可滅菌者，直徑約 6 mm 。 2.2.34.無菌棉花棒或塗抹棒。 2.2.35.無菌濾膜：孔徑0.2 μm或以下之親水性醋酸纖維濾膜。 2.2.36.藥勺、剪刀、小刀、壓舌板及鑷子：可滅菌或可拋棄式者。 2.2.37.無菌冷凍試管。 2.2.38.試藥：氯化鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸氫二鉀（K2HPO4）、磷酸二氫鉀（KH2PO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4?H2O）、無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4, anhydrous）、檸檬酸鐵銨（ferric ammonium citrate）、硫代硫酸鈉（Na2S2O3?5H2O）、硫代硫酸鈉（Na2S2O3）、膽酸鈉（sodium cholate）、檸檬酸鈉（sodium citrate?2H2O）、檸檬酸鐵（ferric citrate）、硫酸亞鐵（FeSO4）、草酸銨（ammonium oxalate）、沙黃O（safranin O）、α-萘酚（α-naphthol）、肌酸（creatine）、碘化鉀、碘、結晶紫（crystal violet）、95%乙醇、O/129（2,4-diamino-6,7-diisopropyl-pteridine）、O/129-PO4（2,4-diamino-6,7-diisopropyl-pteridine phosphate salt）、四甲基對位苯二胺鹽酸鹽（N,N,N,N-tetramethyl-