平面色谱法案例.pptVIP

二、纸色谱法的实验条件 色谱纸的选择 对Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸 对Rf值相差较大的化合物，则可用快速滤纸 固定相　 水或甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或缓冲溶液。（酸、碱） 纸色谱法的实验条件 展开剂的选择　增加展开剂中极性溶剂的比例量，可以增大Rf值；增加展开剂中非极性溶剂的比例量，可以减少Rf值。 常用的展开剂　水饱和的有机溶剂，如水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等 操作步骤 　点样、展开、显色、定性定量分析 主要内容： 比移值及其与K和k的关系、相对比移值 吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂及其选择 薄层色谱定性方法 纸色谱法：原理和实验条件 薄层色谱法应用 1：判断合成反应进行的程度 例如，判断普鲁卡因合成反应的终点。 色谱条件: 吸附剂：硅胶-CMC； 展开剂：环己烷—苯—二乙胺(8:2:0.4)； 显色剂：碘化铋钾溶液。 2：药品的鉴别和纯度检查 3：天然药物成分的鉴别和定量测定 1、理论塔板数 理论塔板数是反映组分在固定相和流动相中动力学特性的技术参数，是代表色谱分离效能的指标。 n=16(L/W)2 L：原点到斑点中心的距离 W：组分斑点的纵向宽度 平面色谱法中,理论塔板数主要取决于色谱系统的物理特性，如固定相的粒度、均匀度、活度及展开剂的流速及展开方式等. 2、塔板高度 塔板高度是由理论塔板数及原点到展开剂前沿的距离(L0 )算出的单位理论塔板的长度。 H=L0/n (4)：分离参数 1、分离度(resolution；R) 2、分离数(separation number；SN) 1：分离度(resolution；R) 两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度(直径)的比值，称为分离度或分辨率，分离度是平面色谱法的重要分离参数。 2：分离数(separation number；SN) 分离数是衡量平面色谱分离容量的主要参数。也是面效的评价参数。 分离数是在相邻斑点分离度为1.177时， Rf＝0和Rf＝1之间能容纳的色谱斑点数。 第三节　薄层色谱法 (Thin layer chromatography；TLC) 固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。 特点： 快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。 试样预处理简单，对试样限制少。 载样量比较大，适用于制备。 仪器简单，操作方便。 分离能力较强。 灵敏度较高。 一、薄层色谱法的主要类型和原理 吸附薄层色谱法 　　原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附的过程。 吸附系数不等实现分离。 　　一般极性强的组分K大，Rf值小；极性弱的组分 K小，Rf值大。 薄层色谱法的主要类型和原理 分配薄层色谱法 原理：多次分配的过程，分配系数（溶解度）不等实现分离 分类：正相色谱、反相色谱 薄层色谱法的主要类型和原理 分配薄层色谱法 正相色谱：水为固定相（硅胶载体），有机溶剂为流动相。 极性强的组分K大， Rf值小。 反相色谱：烷基化学键合相为固定相，水－有机溶剂为流动相。 极性强的组分K小， Rf值大。 二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 吸附剂 硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。 　　应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等 硅胶 活度与含水量的关系：含水量高，活性级高，活度低。 活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高 活度。（注意温度不可过高） 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。 常用硅胶： 硅胶H，不含黏合剂 硅胶G，含煅石膏 硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。 硅胶HF254 吸附剂 氧化铝 　碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合 物，如生物碱、脂溶性维生素等； 中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳 定的化合物； 酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。 活度也与含水量有关。 展开剂(流动相) 同吸附柱色谱 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 　　　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳环己烷石油醚。 展开剂 选择原则：根据被分离物质的极性 Stahl简图：极性物质—活度低（活性级大）的吸附剂--极性展开剂 　 展开剂 混合溶剂 先用单一溶剂展开， 若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等， 如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油