脾细胞生物色谱法和液质联用分析鹿茸—山药药对的补虚活性成分.pdfVIP

• 920 • 囚13 年9 月第白卷第9 期 Jilin 棚mal of TI刷刷Chi明刷刷ne 2013 VIω No.9 毒排柏杨 ·动物药· 脾细胞生物色谱法和液质联用分析 鹿茸一山药药对的补虚活性成分 牛晓晖，张海莲，孙佳明，张辉骨 (长春中医药大学研发中心，长春 130117) 摘要:目的 研究鹿茸.山药药对的补虚活性成分。方法 首先利用液质联用技术分析鹿茸山药药对的化 学成分。并采用脾细胞萃取与液质联用技术，分析经药物作用的脾细胞内活性成分。结果 利用液质联用技 术分析出鹿茸山药药对中的 13 种化学成分，分别为尿嘻嗖、次黄喋吟、异亮氨酸、鸟喋吟、尿苦、肌苦、鸟苦、腺 苦、2 ， 4-二是基.苯甲酸-2在葡萄糖苦、杨梅树皮素、3 ， 5 ， 3-三甲基搁皮素、绵草蕉素 B 和十七碳酸乙醋。经脾 细胞革取和液质联用技术鉴定出一种成分.尿嘈嗖。结论:尿嗜嗖可能为药对促进脾细胞增殖的活性成分。 关键词:脾细胞生物色谱;鹿茸;山药;色谱法 申图分类号: R284 文献标志码:A 文章编号:1∞3 - 5699(2013)ω-0920- 但 明鲁教授鉴定为薯蘸科山药。 W田、-1 细胞增殖及细胞 鹿茸山药药对源于《普济方}，具有补肾壮阳、健 脾益精的功效，主治虚弱、阳事不举、面色不明、小便 毒性检测试剂盒(北京东方德教育科技有限公司)，乙 频数、饮食不思等症。其药对从古至今应用广泛，但 腊、甲酸为色谱纯(Fisher 公司)，水为娃哈哈纯净水。 是对其药对的现代研究甚元。本课题组已对鹿茸一 1. 3 实验动物 昆明小鼠 18 -却 g，雌雄不拘。清 山药药对醇提物(CRP) 的补虚作用进行了研究，证明 洁级，合格证:Sαx-(吉)2010-∞23 ，由长春生物制品 其能抗疲劳，促进脾细胞增殖[1) 。现利用脾细胞萃取 研究所供给。 2 方法 法对其活性成分进行研究。 1 材料 2.1 鹿茸山药药对供试液的制备取鹿茸10g 及ÚJ 1. 1 仪器 Mode1680 型酶标仪(日本 T且ARA 公 药30 g 加人10 倍量的ω%乙醇，超声提取3 次，每次 司，皿RAEUS HERAcell 150 二氧化碳培养箱(日本 1 h ，滤过，合并滤液，在水浴浓缩至干膏，出膏率为 三洋公司) ，倒置显微镜(日本奥林巴斯公司) ，超净工 2.67% 。取鹿茸一山药药对混合膏。.01 236 g，加人 RPMI- l剧。培养液，超声溶解，配制成浓度为 作台 YZ-875( 苏州净化设备厂)，万分之一电子天平 (梅特勒·托利多仪器有限公司) , Agilent 11∞ senes 8∞μg徊L的供试液。 2.2 脾细胞的制备 在无菌条件下取出小鼠脾脏， LC-MS 液质联用仪(美国 HP 公司)。 1. 2 药品与试剂 鹿茸 (CORNU CERyI PAN- 放人盛有即MI-I640 培养液的平皿中，用弯剪剪碎， TOTRICHUM) ，购于吉林省长春市同仁堂药店(批号 经4 层纱布过滤， RPMI-I640 培养液洗 1 遍，用含 2α阴1523) ，经长春中医药大学邓明鲁教授鉴定为为 10%胎牛血清的 RPMI-lωo 培养液配成 2 x 1伊/mL 鹿科动物梅花鹿 Cervus Nippon Temr回nk 雄鹿