高灵敏度化学发光磁酶免疫法检测人绒毛膜促性腺激素论文.docVIP

　　高灵敏度化学发光磁酶免疫法检测人绒毛膜促性腺激素论文 刘军涛 刘儒平 王蜜霞 刘春秀 罗金平 蔡新霞 【摘要】 将磁性微粒与抗体的偶联，通过优化偶联条件提高了偶联效率，制备了高灵敏度的磁微粒生物探针；采用3(2螺旋金刚烷)4甲氧基4(3邻氧酰苯基)1，2二氧杂环丁烷(AMPPD)碱性磷酸酶(ALP)化学发光体系，建立了化学发光磁酶免疫检测方法；对检测方法进行了优化和改进，提高了系统的灵敏度和检测速度，并对HCG样品进行相关检测。结果表明，HCG浓度在0.15～150 IU/L范围内.freelagic enzymelinked chemiluminescent immunoassay method an chorionic gonadotropin(HCG). The monoclonal antibody agic beads to generate magicbiotargeting; Alkaline phosphatase(ALP) onoclonal antibody, adamantane) 4methoxy4(3phosphoryloxy)phenyl1,2dioxetane(AMPPD) iluminescent substrate. Based on this concept, a highly sensitive chemiluminescent immunoassay method odifications ade to optimize the method, and the detection sensitivity and procedure proved accordingly. The detection of the assay could be fulfilled in and the test result of HCG concentration ethod ethod ple operation and fast detection shoiluminescence, magic immunoassay, human chorionic gonadotropin 1 引 言 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由滋养叶层的合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素，存在于孕妇的血液、尿、初乳、羊水和胎儿体内，对维持正常妊娠有重要意义1,2。妇女怀孕后，HCG浓度会按一定规律变化。医生可根据异常情况判断是否先兆流产、异位妊娠、葡萄胎等。某些妇产科疾病、术后治疗过程等都需要跟踪HCG指标变化3。目前，临床诊断中HCG检测方法有放射免疫分析4、电化学免疫分析5 、荧光免疫分析和化学发光免疫分析等6,7。其中化学发光磁酶免疫分析法将磁性分离技术、化学发光检测技术与免疫学方法三者相结合，综合了化学发光法灵敏度高、线性范围广、测定速度快以及免疫法的特异性高、准确性好等优点，还利用了磁性微粒在磁场可控运动的特点，可实现待测物的快速富集，具有更快的检测速度8,9。国外已经相继开发出了基于化学发光磁酶免疫分析法的试剂盒，成功地应用于多种免疫分子的临床检测，但试剂价格昂贵，其配套装置也多为大型检测仪。 本研究将磁酶免疫与化学发光的高灵敏度优势相结合，利用3(2螺旋金刚烷)4甲氧基4(3邻氧酰苯基)1，2二氧杂环丁烷(AMPPD)碱性磷酸酶(ALP)化学发光体系，建立了HCG化学发光磁酶免疫检测方法。其中发光底物AMPPD是一种新型二氧杂环丁烷类化学发光试剂，可在碱性磷酸酶（ALP）的催化下发光。与传统的化学发光试剂相比，性能稳定，几乎无背景干扰，试剂存放时间较长，具有极高的检测灵敏度10。磁性纳米材料经过相应的化学修饰后，将一种抗体结合到固相载体磁性微粒上作为捕获抗体，将另外一种抗体用碱性磷酸酶（ALP）进行标记，加入待测物后，发生免疫反应，形成双抗体夹心物。利用磁分离技术，经过清洗去除多余抗体后，加入底物AMPPD，根据发光强度检测待测物的量。本研究优化和改进了磁性微粒与抗体的偶联和免疫分析条件，可以采用本实验室自制的小型微弱光检测仪1１进行检测，成功实现了对HCG的快速、灵敏检测。 本方法也可应用于其它免疫分子的检测，在临床检测方面具有良好的应用前景。 ２ 实验部分 2.1 仪器与试剂 F4500荧光分光光度计（日本Hitachi公司）； 尼康TE2000U荧光显微镜（日本Nikon公司）；磁分离架（天津倍尔乐生物公司）；JQ1型免疫反应振荡器（上海强运科技有限公司）。 HCG抗原（青岛康原药业）；抗HCG抗体（杭州隆基生物有限公司）；碱性磷酸酶标记抗HCG抗体（ALPHCG）； AMPPD（福建波生生物有限公司）；羧基末端磁性微