分子生物学许晓东4.ppt

4 生物信息的传递（下）;蛋白质是生物信息通路上的终产物，一个活细胞在任何发育阶段都需要数千种不同的蛋白质。因此，活细胞内时刻进行着各种蛋白质的合成、修饰、运转和降解反应。 翻译是指将mRNA链上的核苷酸从一个特定的起始位点开始，按每3个核苷酸代表一个氨基酸的原则，依次合成一条多肽链的过程。 细胞所用来进行合成代谢总能量的90%消耗在蛋白质合成过程中，而参与蛋白质合成的各种组分约占细胞干质量的35%。 真核细胞中：70种以上的核糖体蛋白质，20种以上的氨酰-tRNA合成酶，10多种起始因子、延伸因子和终止因子，约50种tRNA，各种rRNA、mRNA，100种以上翻译后加工酶参与蛋白质合成和加工。;翻译过程： 翻译的起始：核糖体与mRNA结合并与氨酰-tRNA生成起始复合物。 肽链的延伸：核糖体沿mRNA 5‘端向3’端移动，开始了从N端向C端的多肽合成。 肽链的终止与释放：核糖体从mRNA上解离。;在翻译过程中： 核糖体是蛋白质合成的场所。 mRNA是蛋白质合成的模板。 tRNA是模板与氨基酸之间的接合体。 在合成的各个阶段有许多蛋白质、酶和其他生物大分子参与。;4.1 遗传密码——三联子;4.1.1 三联子密码及其破译;确认三联子： 1 移码突变 2 烟草坏死病外壳蛋白亚基400aa/1200b;破译密码： 1 以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成(1961年Nirenberg建立了无细胞体系) UUUUUUUUUUUUUUUUUU - PhePhePhePhePhePhe CCCCCCCCCCCCCCCCCC - ProProProProProPro AAAAAAAAAAAAAAAAAA - LysLysLysLysLysLys A/C共聚核苷： CCC CCA CAC ACC CAA ACA AAC AAA Pro Pro His Thr Gln Thr Asn Lys 多聚二核苷酸poly UG: UGUGUGUGUGUGUGUGUG - CysValCysValCysVal 多聚三核苷酸poly UUC: UUCUUCUUCUUCUUCUUC - PhePhePhePhePhePhe UCUUCUUCUUCUUCUUCU - SerSerSerSerSerSer CUUCUUCUUCUUCUUCUU - LueLueLueLueLueLue;2 核糖体结合技术(1964年,Nirenberg) 人工合成三核苷酸NNN 核糖体 AA-tRNA;;;;4.1.2 遗传密码的性质;;;密码的普遍性与特殊性。密码子表是具有普遍性的，适用于一切生物，但也有些特殊情况。;密码子与反密码子的相互作用。在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以摆动，因而使某些tRNA可以识别1个以上的密码子。;;原核生物中大约有30-50中tRNA，真核生物中可能存在50种tRNA。;tRNA在蛋白质合成中处于关键地位。 tRNA不仅为每个三联密码子翻译成氨基酸提供了接合体，还为准确无误地将所需氨基酸运送到核糖体上提供运送载体，它又被称为第二遗传密码。 特点：存在经过特殊修饰的碱基，3’端都以CCA-OH结束，这是其氨基酸结合位点。;tRNA产生;二级结构 由于小片段碱基互补配对，形成三叶草形的二级结构。三叶草形tRNA分子上有4条根据它们的结构或已知功能命名的手臂： 受体臂：链两端碱基序列互补形成的杆状结构；3’端有未配对的3～4个碱基；3’端的CCA，最后一个碱基2‘和3’烃基可被氨酰化。 TψC臂：其中ψ[psai]表示假尿嘧啶，是tRNA分子所拥有的不常见核苷酸。 反密码子臂：位于套索中央有三联反密码子。 D臂：含有二氢尿嘧啶。;各种tRNA均有74-95个核苷酸，其中有22个核苷酸是恒定不变的。 受体臂：链两端碱基序列互补形成7bp的茎；3’端有未配对的3～4个碱基；3’端的CCA，最后一个碱基2和3’烃基可被氨酰化。 TψC臂：常由5bp的茎和7nt的环组成。负责核糖体的识别。 反密码子臂：常由5bp的茎和7nt的环组成。 D臂：含有二氢尿嘧啶。茎的长度常为4bp。 额外臂：4-21nt不等。;tRNA上碱基的修饰;所有的tRNA都能够与核糖体的A位点和P位点结合。 A: 氨酰-tRNA结合位点 P: 肽酰-tRNA结合位点 tRNA能被翻译辅助因子识别：;4.2.1 tRNA的L形三级结构;酵母苯丙氨酸tRNA的三级氢键;;4.2.2 tRNA的功能;4.2.3 tRNA的种类;无义突变和错义突变的校正;;4.2.4 氨酰-tRNA合成酶;;氨酰-tRNA合成酶与tRNA的识别;(fMet-tRN