人乳头瘤病毒L2 蛋白的病毒样颗粒疫苗研究.PDFVIP

·366 · 中国免疫学杂志2016年第32卷 doi:10.3969/ j.issn.1000鄄484X.2016.03.016 人乳头瘤病毒L2 蛋白的病毒样颗粒疫苗研究 蒋摇 蓉摇 李军强摇 杨鸣鸣摇 朱摇 涛摇 宇学锋摇 邵忠琦 (天津康希诺生物技术有限公司,天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室,天津 300457) 摇 摇 中图分类号摇 R373郾9摇 R392鄄33摇 摇 文献标志码摇 A摇 摇 文章编号摇 1000鄄484X(2016)03鄄0366鄄06 [摘摇 要]摇 目的:构建乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与人乳头瘤病毒(HPV)L2抗原的融合蛋白,在大肠杆菌中重组表达 形成病毒样颗粒结构;通过小鼠模型检测HBc鄄L2融合蛋白的免疫原性,并研究免疫后获得的小鼠血清对HPV假病毒的中和 效力。 方法:通过DNA合成构建16型人乳头瘤病毒L2基因片段与HBcAg基因的融合基因,将其克隆至表达载体pET9a并 在大肠杆菌中进行HBc鄄L2融合蛋白表达;将经纯化、鉴定后的融合蛋白免疫BALB/ c小鼠,用间接ELISA方法检测小鼠血清 中针对L2抗原的抗体效价,并分别研究小鼠血清对16型和18型HPV假病毒的中和效力。 结果:HBc鄄L2融合基因经大肠杆 菌系统表达形成可溶性蛋白,经硫酸铵沉淀和CL鄄4B凝胶分离纯化后获得纯度80%的HBc鄄L2蛋白;分子筛高效液相色谱鄄 多角度激光光散射(SEC鄄MALS)联用技术和透射电子显微镜的分析结果表明,HBc鄄L2 融合蛋白在表达过程中自动组装形成 稳定的病毒样颗粒;将纯化后的HBc鄄L2蛋白免疫BALB/ c小鼠可获得针对L2抗原的高滴度抗体,且小鼠血清具有中和16和 18型两种假病毒的中和抗体活性。 结论:HBc鄄L2病毒样颗粒可以有效地增强L2抗原的免疫原性,并可刺激机体产生针对多 型HPV 的免疫保护力,是一个具有潜力的新型广谱HPV疫苗。 [关键词]摇 人乳头瘤病毒;L2抗原;乙肝病毒核心抗原;病毒样颗粒;免疫原性;中和抗体 Study of a virus鄄like particle vaccine containing N鄄terminal epitopes of human papilloma virus L2 protein JIANG Rong,LI Jun鄄Qiang,YANG Ming鄄Ming,ZHU Tao,YU Xue鄄Feng,SHAO Zhong鄄Qi郾Tianjin CanSino Biotechnology Inc郾Tianjin Corporate Key Laboratory of Respiratory Bacterial Recombinant and Conjugate Vaccine, Tianjin300457,China [Abstract]摇 Objective:To prepare a virus鄄like particle (VLP),containing Hepatitis B virus core antigen (HBcAg) and N鄄 terminal peptides of the L2 protein of human papilloma virus (HPV),and investigate the immunogenicity of the VLP in mice and the protectionagainstdifferentstrainsof HPV郾Methods:AfusiongenewassynthesizedtoinsertaDNAfragment,codingfortheN鄄terminal epitopes of the L2 protein of HPV16,into the HBcAg coding sequence;HBc鄄L2 fusionproteinwashighly expressed inE郾coliusingthe pET9a andBL21(DE3) expression system;the purifiedfusion protein was used to immunize BALB/ c mice and antibody titers against the L2 epitopes inmouseseraweredeterminedby indirectELISA;thelevelsof neutra