显微镜技术及其功能配置应注意的若干问题 - 中国医科大学.PDFVIP

显微镜技术及其功能配置应注意的若干问题 ① ① 王雁 崔泽实 * 中国医科大学 沈阳 110001 光学显微镜较为广泛应用于医学实验室，随着近代光学技术的发展及微电子、计算机等 技术的融合，更赋予这一传统仪器技术以新的生命力。在掌握必要的显微镜及其各种镜检方 法的理论知识基础上，精确进行调试、校准和定期维护，对保证显微镜技术的有效利用及观 测质量甚为重要。 1 安装与维护 安装与维护是保证显微镜正常使用的基础条件。显微镜应安置在无尘、无振动、无化学 腐蚀性暴露、无过度光投照散射、相对湿度低于60 ％的实验室内。 无尘是安装使用光学检测仪器的特定要素[1]，尤其是进行暗场、DIC相差、荧光等镜检 时。除要保持室内清洁外，重在对显微镜施实时养护。清洁显微镜光学器件先可用吹气风球 吹朔掉表面的灰尘颗粒，随之用专用擦镜纸蘸适量擦镜液（乙醚和乙醇7:3配制的混合液） 由内向外螺旋跟进擦拭，而后用干纸擦，再用吹风球吹干；对≥40×物镜前透镜要使用质地 较软的木牙签或类似物体磨钝尖端包上至少两层擦镜纸蘸擦镜液轻擦，不能用坚硬的竹牙 签，以免牙签透过擦镜纸划伤透镜面。使用油镜后要立即湿擦两次，同时检查相邻的其它倍 率物镜是否在转换镜头时沾染上镜油，如有一并擦拭之。但注意不是所有光学部件都可如此 擦拭，对镀有特殊光学涂层的偏光镜检的起偏镜及检偏镜、DIC棱镜、荧光激发发射滤光片 组件等，平时要常用吹风球吹朔，一旦沾染最好涂液态胶类物质干后揭去粘除污染物。不能 用有机溶剂（如高浓度酒精）擦拭镜体。 无振动体现两个涵义。一是安装位置远离振动源，安装台面水平、稳定、无振动，必要 时配置专用防震台，配套计算机最好不要与显微镜放在一个台面上且两台间要留有空隙以免 联动。二是操作过程无振动，特别是在镜像采集的曝光时间内、显微操作、显微切割等精密 [2] 环节 。 除外荧光镜检，控制室内的光照度和方向非常重要，照明要均匀避免过度炫光。光照不 能刺激人眼，也不能直接投照显微镜的光路器件，把显微镜临窗安置是不甚合适的。 较长时间不用的可拆卸光学部件要放入干燥罐中保存，并定期更换吸潮剂。在湿度较高 季节，室内最好安装除湿机并及时倒掉水箱内的水。 2 调整与校正 主要是显微镜光学器件的调整、校准及其光学参数设置。 2.1 照明光源灯丝对中 对没有预定灯丝中心的显微镜需要在更换灯泡或搬动显微镜后进行此项调节。方法是缩 小视场光阑，在视场光阑处放置乳白磨砂滤光片或一块硫酸纸，可看到灯丝像和缩为点状的 1 视场光阑像呈现。利用灯箱外方的三个调节螺杆进行调节操作， 其中一个调整灯泡的聚焦直到灯丝像清晰可见，如点状视场光阑 像不在灯丝中央，则用其它两个螺杆做上下、左右调整，直到灯 丝完全调至中央为止，见图1。 2.2 聚光镜光(合)轴调节 聚光镜光轴偏移产生的问题是视场照明不均，因而此项操作要纳入显微镜的定期校准规 程。在明场下，用10×物镜观察标本并完成调焦；将视 场光阑尽量缩小、聚光镜孔径光阑开至最大，在视场内 可见到视场光阑的轮廊像（视场光阑像不清晰，可稍微 调节聚光镜的升降螺旋) ；如后者不在视场中央，则交替 旋调聚光镜外侧的两个调中螺杆将其调至中央部分，而 后逐渐地开大视场光阑，能看到光阑向视场周缘均匀展开直至视场光阑的多角轮廓像完全与 视场边缘形成内接，表明聚光镜与显微镜光路达到合轴。合轴后再略微开大视场光阑，使轮 廓像刚好处于视场外切或稍大一些，这样即适于作镜检观察，调节过程见图2 。注意不要忘 记将聚光镜升至原位，其透镜距镜台平面0.1mm，焦点位于上方1.25mm处, 如聚光镜低于此 位将改变焦点并导致部分光斜照标本产生过多衍射光影响分辨率。 倒置显微镜要根据聚光镜标定的工作距离调节聚光镜的位置，实际上当用10×物镜观察 到清晰的视场光阑时应当是合适的距离。 2.3 视场光阑调节 为获得更好的镜像反差，应尽量屏蔽多余 的杂散光进入观测镜场或成像区域，在经目镜 配合不同倍物镜进行观测时，可调节视场光阑 像对应目镜视场形成外切（图3左）；在显微