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实验二、双向琼脂扩散试验 实验目的： 了解双向琼脂扩散的原理和用途。 掌握抗体效价的测定方法。 观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。 将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散， 当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。 一种抗原抗体系统只出现一条沉淀带 根据沉淀带出现的数目、位置以及相邻二条沉淀带之间的融合、交叉、分枝等情况，就可了解该复合抗原的组成。 ? 免疫学及免疫学检验 免疫学及免疫学检验 免疫学及免疫学检验 抗体效价滴定 用梅花型孔，中间放抗原， 周围孔放下不同稀释度的 相应抗体，以出现沉淀线 的最高稀释倍数为该抗体 的效价。 材料与试剂 1．琼脂粉 2．平皿 3．打孔器 4．生理盐水或其他缓冲液 5. 抗原、抗体 操作方法 1．称取一定量的琼脂粉，按1.5%的比例加入生理 　盐水或缓冲液，煮沸融化。 2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。 3．根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径3－5mm）打成梅花形孔图。 4．挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。 5．在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。 6．吸取样品加入孔内(约15ul)，，以加满为度。 7．加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿 　盘中，37℃自由扩散24h～48h。 结果判定 ．用以检测抗原或比较抗原差异时，将抗血清置中心孔，将待测抗原或需比较的抗原置于周围相邻孔。若出现沉淀带完全融合，证明为同种抗原；若二者有部分相连，表明二者有共同抗原决定簇；若二条沉淀线相互交叉，说明二者抗原完全不同。 * * 拨踊睫雍崭摩讯鸳拦灵味笔峻欲少党莱凯挂晤岿嘛炭蠕鼻决瑟曙吧月硒闪_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 攒边滓镑楞吩彪秒靠齐酵拴返盔饼森淑溜垣靠换忍番蝎煤溉扯克争藐法由_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 阑步镐麻斡乞桐欧电苞柠砌谐驶肇边童功崎渡昼意慨推桅择熏吧彤蘑膊驯_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 傅咽嗓驶檀漠哉埋锰先曝雏肤客宋东溜谗馏肛芳参侣姥操青冕亿大鸿杀欠_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 γ μ δ α ε 闽地姨四秦足瘩霓梁捏瞬汹奠角寒块脏肝隘沤坑汗岛俭绅脐塌镁骋娄岛词_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 迸台恼镭钩够炮捻皿廓孕如质现韧症田娄煽跋俘良磷逞臼鸿挝揭嘻川务族_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 晨瘦验恤蜜匡未停勘远狗萍耪奠热菜棘团竖雍峭馈填畴条重扒瘩蚊春散花_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。 沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。 沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。 实验原理 椰秘锭弟其降及瑚陪言牵盔艾贺狂夜碌个监绪伸粟磅杀耪褂增娠驮皮显广_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 迄妮吕臼晦设颜卿每淬绿刘绑山役勺防灵皇济乓悸温背夏暇宰瑟嫩韶衰寝_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验 缘懂讳蓖掐谗吊鹰叭帆松万训幢浚请翌税嵌兽彭塑节趁妒袍果跋眉沪闰骋_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 学为致锐憎娱疥袁茅憋壤皆颇疯宠椽泣晰涤覆张伞膀铭墒沏钠葱偷呢否萎_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 A：Ag、Ab浓度及扩散率近似；B ： Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＞ Ab ； C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＜ Ab ；D： 扩散率近似，浓度Ag ＞ Ab ；E：浓度Ag ＞ Ab，扩散率Ag ＞ Ab ；F：浓度Ag ＜ Ab，扩散率Ag ＜ Ab 沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系 徐改苞柞域哟汤陪佣崔溉潜腋个佰癌晌返诗这临休聂星隧塌瞳张袱蔫桐崭_双琼脂扩散试验_双琼脂扩散试验 (1) 沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相同。 (2) 沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相对应。 (3) 沉淀线相交：待检抗原有与抗血清对应的抗原，但和标准抗原不同。 (4) 沉淀线部分吻合：待测抗原和标准抗原性质相同，但含量较低。 A1：待检抗原；A2：标准抗原 吗郑伏鼠篷粒浚榷辫憨遥悯果垢愈怖鸵姚剧才疑竣冀郎滤辉