第8章HPLC试卷.ppt

* 3．建立方法时，应考虑下列事项： ①首选填料为十八烷基键合硅胶，并至少对两根不同品牌的色谱柱进行比较试验，其中一根为国产柱。 ②流动相首选不是弱电解质的甲醇-水系统，应尽可能少用含有缓冲液的流动相，如为碱性药物，流动相的pH值应为7~8；如为酸性药物，流动相的pH值应为3~4。 ③尽可能选用流动相作为溶剂。 ④内标物应首选易得到的纯度较高的化学试剂或对照品，应与待测物质化学结构相似，理化性质接近，峰的响应值相当，以及分离度应大于1.5，另应考虑对照品的来源问题。 ⑤检测器首选UV检测器。 * 4．采用HPLC法进行有关物质检查时，如杂质峰的响应值与主成分峰的响应值相差太大，应首选自身对照法，而不宜选用面积归一化法。 5．HPLC法用于原料药的含量测定。如以内标法测定含量，应考虑内标物是否含有干扰供试品的杂质；如以外标法测定含量，对照品与供试品应各取样2份，对照品溶液各进样3次，供试品溶液各进样2次，计算相对标准偏差（RSD应不得大于l.5％）。 * 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * 最常使用的全孔微粒硅胶（3～10μm）是化学键合相硅胶。 这种固定相要占所有柱填料的80％。它是通过化学反应把某种适当的化学官能团（例如各种有机硅烷），键合到硅胶表面上，取代了羟基（－OH）而成。 它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料类型。 化学键合相硅胶 * 硅胶 ( SiO2?n H2O) ： OH OH —Si—O—Si— ? ｜ ｜ 最常用的键合相键型是： ｜ ｜ —Si—O—Si—C ｜ ｜ 重要的键合相是：硅烷化键合相，它是硅胶与有机硅烷反应的产物。 R1 R1 —Si—OH + X—Si—R —Si—O—Si—R + HX R2 R2 硅胶 有机硅烷 键合相 X ━ Cl，CH3O，C2H5O等。 R ━ 烷：C8H17（即C8填料），C10H21，C18H37等。 R1 、R2 ━ X、CH3等。 * 使用微粒硅胶要特别注意它的使用pH范围是 2～7.5，若过碱（＞pH8），硅胶会粉碎或溶解；若过酸（＜pH1），键合相的化学键会断裂。有些特殊的健合相可以用于pH 9～11。 键合相使用硅胶作基质的优点是： ①硅胶的强度大； ②微粒硅胶的孔结构和表面积易人为控制； ③化学稳定性好。 * 最常用的“万能柱”填料为“C18”，简称“ODS”柱，即十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl，简称ODS）。 这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。 由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能