第讲++基因克隆的载体与受体.ppt

③把质粒切成线性 ④共同转染细胞 在细胞中发生同源重组，把外源DNA加到病毒基因组中，并包装成重组病毒颗粒。 质粒与病毒DNA（缺失E1或E3） 1983年P.F. Bates和R.A. Swift ② Bates---Swift 改良方案 a. 具有两个cos位点。 SmaI平端的连接效率低，阻止了载体臂的自我连接，增加了外源DNA的连接效率。 1）特点： b. 一个SmaI切点把两个cos位点分开。 c. BamHI克隆位点。 c2XB cosmid载体 Bates---Swift 克隆过程： 第三节 大分子DNA克隆载体 A.W.Murray 1983年形成基础理论, D.T.Burke等1987年变为现实。 一、酵母人工染色体 1. YAC的特点： （1）只能在酵母细胞中扩增。 （yeast artificial chromosome, YAC) （2）克隆容量大，为230kb-1700kb。 （3）构建原理，按染色体结构构建。 （1）DNA复制起始点（ori） 2. 染色体复制和遗传的三个基本组件： TEL TEL CEN ORI （2）着丝粒（centromere，cen） （3）两个端粒（telomeres，tel） Leu ARS CEN Leu- Yeast 后代死 Leu- Yeast 80%后代死 Leu- Yeast 后代活 Leu- Yeas