鸡法氏囊病微量固相放射免疫检测技术的研究 - 核农学报.PDFVIP

核 农 学 报 　1998 ,12 (4) :225～230 225 A cta A g ricult u rae N ucleatae S i nica 鸡法氏囊病微量固相放射免疫检测技术的研究 赵妙珍 　王炳奎 　金子渔 (浙江省农业科学院原子能利用研究所 　杭州 　3 1002 1) 范坤晓　张 　存 (浙江省农业科学院畜牧研究所 　杭州 　3 1002 1) 　　采用放射免疫分析原理对鸡法氏囊病检测进行了研究 ,并对整个技术操作流程 进行了一些最佳条件的摸索 ,从而建立起鸡法氏囊病的微量固相放射免疫分析法 。 试验表明 ,该法不仅灵敏度高 ,特异性强 ,操作简便 ,适合于大规模样品的检测 ,对鸡 法氏囊病的早期测报和采取相应的防治措施具有重要的实际意义 。 关键词 : 鸡 　法氏囊病 　微量固相放射免疫检测 前 　　　言 鸡法氏囊病是一种急性高度接触传染性病毒病[ 1～5 ] ,该病一旦发生便能迅速传播 , 同群 鸡约在 1wk 内都可被感染 ,感染率可达 100 % ,如不及时采取措施 ,邻近鸡舍在 2 ～3wk 后也 被感染发病 ,发病后 3 ～7d 为死亡高峰 , 以后迅速下降 ,死亡率一般为 5 %～15 % ,最高可达 40 % ,肉鸡的增重降低 5 %～10 % ,给养鸡业造成严重损失 。我们根据放射免疫分析原理对鸡 法氏囊病进行了检测技术的研究 ,建立了鸡法氏囊病的微量固相放射免疫分析法 ,取得了较好 的结果 。 试验材料与仪器 p H96 包被缓冲液为 N a CO 159g/ L 、N aHCO 2 93g/ L 和 N aN 02g/ L ; p H74 磷酸 2 3 3 3 缓冲液为 N aCl 8g/ L 、KH PO 02g/ L 、N a HPO ·12 H O 29g/ L 、KCl 12g/ L 、Tween20 05ml 2 4 2 4 2 和 N aN3 02g/ L 。放射性同位素 N a125 I 由中国原子能院提供 。Iodogene 由中国农科院原子能 所提供 。Sep hadex G50 为进口产品。 试验鸡品种为石岐黄 ,孵化后进行隔离饲养 。试验兔品种为新西兰大白兔 ,每只体重 15 ～2 0kg , 由本院畜牧所动物饲养场提供 。 主要测试仪器包括 FJ603 # 型闪烁探测计数器 、蠕动泵 、部分收集器 、恒温水浴箱 、离心 机和聚苯乙烯培养试验板 。 特异试剂制备 ( ) ( ) IBD VAg 抗原 的制备 :先将小鸡隔离饲养至 32d 龄 ,人工接种发病 滴鼻 、眼 72h 后 ,取 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 226 核 　农 　学 　报 12 卷 法氏囊于生理盐水中将其捣碎成匀浆悬液 ,低温冻融 ,离心抽提 ,再用蔗糖不连续梯度离心收 集病毒带 ,透析 、浓缩 、收集后测定蛋白含量 ,低温保存备用 。 IBD VAb 的制备与纯化 :选择健康的新西兰大白兔进行免疫 。兔对抗原的反应性好 ,能产 生高亲合力的抗体 ,并能提供足够数量的血清 ,来源比较容易 ,价格便宜 。为了提高兔对免疫