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- 2017-07-04 发布于境外
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rna提取一般步骤总结 - 资料中心 - 生物在线
RNA提取总结RNA提取一般步骤总结
- E/ a% A-RNA提取原理:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。- M: d9 I3 }8 YRNA提取的一般步骤4 e$ s p+ [6 l6 m* b 所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即:样品细胞或组织的有效破碎;有效地使核蛋白复合体变性;对内源RNA酶的有效抑制;有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离;对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸,再用氯化锂将RNA沉淀出来;直接在酸性条件下抽提,酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失,目前该方法的使用频率已很低。0 i2 O) [7 e1 S P4 K8 l$ ?4 |实验步骤:: ?1 i1 U ^% N% A! z? ???破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。 Q8 E+ S9 a+ v1 m7 i+ ~/ S??V1、 破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行,可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织,加入β-M
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