红外与拉曼光谱-现代生物学仪器分析-武汉大学.PDF

红外与拉曼光谱红外与拉曼光谱 (Infrared and Raman sppectroscopypy) 梁梁 毅毅 ((武汉大学生命科学学院武汉大学生命科学学院)) 现代仪器分析中的 “四大谱”和 “三大法” 生物分子的结构分析生物分子的结构分析传统上最有效的方法是传统上最有效的方法是 “四大谱”：  紫外-可见光谱、红外光谱、核磁共振波谱和 质谱质谱 生物大分子生物大分子 （（蛋白质和核酸等蛋白质和核酸等））结构测定结构测定的的 最重要和应用最广泛的三大方法： X射线晶体衍射分析、核磁共振波谱分析和 电镜三维重构电镜三维重构 远红外光谱或分子转动光谱：转动能级间的能量差 Er = 0.005-0.050 eV ，跃迁产生的吸收光谱位于远红 外区外区 红外光谱或分子振动光谱：振动能级的能量差Ev = 0.05-1 eV ，跃迁产生的吸收光谱位于红外区，吸收光 波长范围波长范围22.55mm 紫外-可见光谱或分子的电子跃迁光谱：电子能级的能 量差较大Ee = 1-20 eV ，电子跃迁产生的吸收光谱在 紫外紫外-可见光区可见光区，，电子能级之间的跃迁对应于电子能级之间的跃迁对应于可见光区可见光区 （400-750 nm ）、近紫外光区（200-400 nm )和远紫 外光区（10-200 nm ) 分子振动光谱分子振动光谱，包括包括红外光谱红外光谱与与拉曼光谱拉曼光谱，得到的是得到的是 有关生物样品分子振动能级的信息 吸收光谱吸收光谱 散射光谱散射光谱 红外光谱外光谱 紫外紫外-可可见吸收光谱收光谱 拉曼光谱拉曼光谱 样品分子吸收红外光引 引起的是电子能级之间 所得到的振动能级的信 起的是振动能级之间的 的跃迁，属于电子光谱 息不是来自样品对光的 跃迁，属于振动光谱 吸收，而是来自样品对 光的散射 红外光谱区的分类 红外光谱区在可见光区与微波区之间，其波长范围 一般为一般为0.75-1000 m 红外光谱区的划分 名名 称称 ((m)) 波数波数((cm-1)) 能级跃迁类型能级跃迁类型 近红外区 0.75-2.5 13333-4000 O-H、N-H 、 C-H键的倍频吸收 中红外区 2.5-50 4000-200 分子中原子的 振动及分子转动 远红外区 50-1000 200-10 分子转动 晶格振动 红外光谱产生的条件 生物分子吸收红外光必须满足如下两个条件 ☆☆ 红外光红外光的能量应恰好能满足振动能级跃迁所需要的能量应恰好能满足振动能级跃迁所需要 的能量，当红外光的频率与生物分子中某基团的振 动频率相同时，红外光的能量才能被吸收 ☆ 红外光与生物分子之间有耦合作用，分子必须有 偶极矩的变化 有大量已知样品有大量已知样品 对样品无 的振动光谱数据 破坏