第七章化学酶工程剖析.pptVIP

减少了酶分子内部基团的热振动，增强酶的热稳定性。 * * Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=Vm/2时， Km是酶极为重要的动力学参数【S】=Km,单位为mol/l。 * * 血脑屏障是指脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障 毛细血管内皮（连续型，内皮细胞间有紧密连接） 结构 基膜（完整） 胶质膜（星形胶质细胞的脚板） 功能：防止有害物质进入脑内，维持内环境的相对恒定。 * 7.1.3 酶分子化学修饰的方法 1. 酶分子侧链基团 的化学修饰 （1）几种重要的修饰反应 （2）特定氨基酸残基侧链基团 的化学修饰 2. 酶分子的亲和标记 3.大分子结合修饰 聚乙二醇 右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯 糖肽 具有生物活性的大分子物质 4. 酶分子的化学交联 交联剂：具有两个活性反应基团的双功能试剂，可在酶分子内相距较近的两个氨基酸残基直接形成共价交联，使酶分子空间构象更稳定。 交联酶晶体制备 扩充知识点—金属离子置换修饰 把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。 常用的离子：大都是二价金属离子。α-淀粉酶中的钙离子（ Ca2+ ），谷氨酸脱氢酶中的锌离子（ Zn2+ ），超氧化物岐化酶分子中的铜、锌离子（ Ca2+ 、Zn2+ ） 从酶分子中除去其所含的金属离子，酶会丧失催化活性。重新加入原有的金属离子，酶的催化活性可恢复。若用另一种金属离子进行置换，可使酶呈现不同的特性：酶的活性降低或增加。 举例 将基质金属蛋白酶的Zn2+除去，然后用Ca2+置换，则酶活力可提高20-30%。若将钙型蛋白酶制成结晶，则其酶活力比锌型蛋白酶结晶的酶活力提高2-3倍。 应用：只是适用于在分子结构中本来含有金属离子的酶。 金属离子置换修饰的过程 除去原有的金属离子：加入金属螯合剂EDTA，使酶分子中的金属离子与EDTA形成螯合物。通过透析、超滤等将EDTA-金属螯合物从酶液中除去，此时，酶称为无活性状态。 加入置换离子：去离子的酶液中加入另一种金属离子，酶蛋白与新加入的金属离子结合，得到置换后的酶。 定义： 在较温和条件下，以可控方式使酶同某些化学试剂发生特异反应，从而引起酶分子中某些基团发生共价的化学改变的过程（狭义） 。 7.1.1—7.1.2 小结 化学修饰原因 酶修饰的方向 基本原理 酶分子化学修饰的基本要求 1． 稳定性不够，不能适应大量生产的需要。 2． 酶的主要动力学性质的不适应。 3．体外的反应条件不在其最适反应条件范围内。 4．临床应用的特殊要求不符合。 核酸水平 蛋白质水平 1． 增强酶天然构象的稳定性与耐热性 2． 酶表面形成缓冲外壳，抵御外界环境，维护酶活性部位稳定性。 3． 大分子修饰剂产生的空间障碍遮盖酶活性部位或敏感键，增加酶抗抑制剂、抗失活因子能力。 4． 修饰可破坏抗原决定簇的结构，使酶抗原性降低或消失。 酶性质的了解 修饰剂的选择 修饰反应条件的选择 修饰反应定性定量检测 7.1.3 酶分子化学修饰的方法 1. 酶分子侧链基团 的化学修饰 （1）几种重要的修饰反应 （2）特定氨基酸残基侧链基团 的化学修饰 2. 酶分子的亲和标记 3.大分子结合修饰 聚乙二醇 右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯 糖肽 具有生物活性的大分子物质 4. 酶分子的化学交联 5. 金属离子置换修饰 化学修饰（广义） 凡通过化学基团的引入或除去，而使酶蛋白共价结构发生改变，称为酶蛋白的化学修饰（广义）。 利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构和空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能。 7.1.4 化学修饰酶的特性 1．热稳定性 2．抗原性 3．体内半衰期 4．最适pH 5．酶学性质的改变 6．对组织的分布能力变化 1．热稳定性 原因： 1．修饰剂存在多个活性反应基团，可与酶多点交联，稳定了酶的天然构象，增强了酶的结构刚性，不易伸展打开。 2．减少了酶分子内部基团的热振动。 热稳定性举例： 例： 过氧化氢酶：右旋糖酐：50℃/10min，40%-90% 糜蛋白酶：右旋糖酐：37℃/6h，0%-70% 糜蛋白酶：肝素：37℃/6h，0%-80% 尿酸酶：人血清白蛋白： 37℃/48h，50%-95% 二．抗原性 原因： 组成抗原决定簇的基团与修饰剂形成了共价键，破坏了抗原决定簇的结构 大分子修饰剂遮盖抗原决定簇和阻碍抗原、抗体产生结合反应 部分可消除。PEG、人血清白蛋白在消除酶抗原性上效果明显。 3．体内半衰期 体内半衰期延长 酶在经化学修饰之后，增强了抗蛋白水解酶、抗抑制剂和抗失活因子的能力。 对于提高药用酶的体内疗效有重要意义。 4．最适pH 有些酶经过化学修饰后，最适pH发生变化 例如：猪肝尿酸酶