核酸分子杂交.pptVIP

八、脱探针的方法及注意事项 ： 尼龙膜可以重复利用，因此杂交后不能干燥，一定保持湿润。 处理方法：0.1X SCC/0.1%SDS、100℃ 5－10分钟 DNA的膜还可以用0.2N NaOH处理 九、标记的方法 1、缺口平移法 （Nick Translation） 原理及过程： 反应体系中DNA酶I随机在探针DNA上打开缺口，然后利用DNA聚合酶I 5’ → 3’外切酶活性，在缺口处按5’→ 3’方向切除单核苷酸；同时DNA聚合酶I有5’ → 3’的聚合酶活性，在缺口处3’端加入底物中的单核苷酸，弥补缺口处的核苷酸链。随着反应的进行底物中被标记单核苷酸，并被随机掺入。DNA聚合酶I的两种作用交替进行，探针即被标记。 2、随机引物法（6核苷酸引物标记法） 原理及过程：利用E.coli DNA聚合酶I的Klenow亚单位，合成含有标记核苷酸的DNA链。Klenow具有5’→ 3’聚合酶活性。 被标记的DNA（探针）变性成单链，引物与模板结合。在Klenow的催化下，以引物3’端为起点，沿模板3’ → 5’方向合成DNA新链。反应体系中含有标记的dNTP,随机掺入新合成的DNA链中，探针即被标记。 3、末端标记 * 核酸分子杂交 一、概念： 1、分子杂交（hybridization) :有一定同源性的两条核酸单链，在适宜的温度和离子浓度