2015版基因工程的研究策略与实践.pdf

基因工程的研究策略与实践 杨芳 昆明医科大学细胞生物学 与医学遗传学系 2015.9 1 什么是基因工程？  在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载 体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参 入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能 持续稳定地繁殖。  genetic engineering、 gene engineering 、 gene manipulation 、 recombinant DNA technique、 gene cloning 、 molecular cloning 2 基因工程的主要内容或步骤  从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步 骤，分离出带有目的基因的DNA片段。 （切）  在体外，将带有目的基因的外源DNA 片段连接到能自我复制 的并具有选择标记的载体分子上，形成重组DNA分子。 （连）  将重组DNA分子转移到适当的受体细胞（寄主细胞），并与之 一起繁殖。 （转、筛）  从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的受体 细胞克隆。 （扩）  从这些筛选出的受体细胞克隆，提取出已经得到扩散的目的基 因，供进一步分析研究使用。  将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗 传背景下实现功能表达，产出人类所需要的物质。 3  一般原理 基因表达 蛋白质纯化  原理应用 以一个研究生的课题为例 4 第一部分 基因表达 DNA分子中所蕴藏 的遗传信息通过转录 和翻译形成具有生物 活性的蛋白质或通过 转录形成RNA发挥功能 作用的过程。 tRNA 原核转录本－基 因的全长拷贝 rRNA hnRNA ——mRNA 真核断裂基因的转录本 －其表达子的相应拷贝 5  转录 (transcription)  转译 (translation) 6 转录 转录后的加工： 剪接、加帽、 加尾 翻译 肽链的起始、 延长、终止 翻译后加工 7 多肽类激素药（人胰岛素、人生长激素、卵泡刺激激素） 人骨形成蛋白 人造血因子（促红细胞生成素、GM-CSF） 重组酶（先天性酶缺陷） 人细胞因子（α 干扰素、β 干扰素、IL-1、IL2、IL11） 融合蛋白（抑制为作用机理） 人血浆蛋白因子（凝血因子VIII、VII）