实验五大肠杆菌感受态细胞的制备汇编.ppt

实验五 大肠杆菌 感受态细胞的制备 一、实验目的 掌握制备大肠杆菌感受态细胞的方法 二、实验原理 遗传物质的传递，一般常用接合转移、细胞融合、转导、转染、转化等方法进行。 转化是指某一细胞由于接受了外源DNA，而导致其原来的遗传性状发生改变，这种遗传性状包括遗传型与表型的改变。 感受态是受体菌能接受外源DNA（周围环境中的DNA分子）能力的一种生理状态，一般认为在细菌生长对数期的后期是发展感受态的理想时期。 三、实验材料 水浴锅、制冰机、离心机、超净工作台、恒温培养箱、各式移液器、培养皿； 大肠杆菌DH5α； LB液体培养基、0.1M CaCl2溶液。 四、实验步骤 ①挑取单菌落接种于LB液体培养基中，37 ℃，250r/min，过夜。 ②取150μl过夜培养物接种于15ml LB液体培养基中， 37 ℃，250r/min，培养至OD600 ≈0.375（一般为2h左右，呈云雾状，使细菌处于对数早期或中期）。 ③将培养物1.5ml分装到预冷无菌的指形管中，冰上放置5～10min。4 ℃，2000rpm，10min，弃上清。 ④沉淀用1ml冰冷的CaCl2溶液重悬， 4 ℃，2000rpm，10min。 ⑤重复步骤④。 ⑥用200μl冰冷的CaCl2溶液重悬细胞，冰上放置30min，备用。 五、思考题 重组基因的导入方法有哪些?