基因工程的发展历史1分子生物学基础建立期.ppt

基因工程的工具及方法 限制酵素(restriction enzyme) 連接酵素(ligase) 載體(vector) 宿主(host) 限制酵素(restriction enzyme) 可從不同來源之DNA製造兩端帶有相同黏合端子(cohesive end)之核酸序列片段。 不同之限制酵素因認定序列(recognition site)之不同，分可切製200至數千個核甘酸之DNA，因而容許轉殖具有生物功能（基因）之核酸片段（通常一個基因約有1000個以上核甘酸）。以切割序列含有為七、六、五、四個核甘酸認定序列者，因切割後之DNA片段較大，較為有用。 連接酵素(ligase) 假如限制酵素是可切割特定DNA序列之“剪刀”，則連接酵素有如“漿糊”，可用來連接不同來源、不同大小但帶有相同黏合端序列之核酸片段。較常用之連接酵素有E. coli ligase及T4 ligase。這兩種ligases均可連接有黏合端子之雙股核酸片段，T4 ligase更可連接blunt end之核酸片段。通常在基因轉殖之操作裡都使用可產生相同黏合端序列之限制酵素來切割質體及樣品DNA。因使用相同之限制酵素切割之DNA片段都有互補之黏合端序列，故連接酵素就可把質體及樣品DNA片段結合，製成所謂之重組核酸(recombinant DNA)。 載體(vector) 一個可在生物體中世代相傳，攜帶外來核酸片段之