抗人肺腺癌单链抗体的构建及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

维普资讯 O中d国nJ庙C∞暂∞治rB烹m志1…999Jun…；6…(2)：125-130 抗人肺腺癌单链抗体的构建及在大肠杆菌 中的表达 张 屹 ． 董 墨 张明生 黄浩曼 林 睛 俞小淙 陈 艾 李新元△ 王登顺△(中国科学 院遗传研究所 北京 100101) 摘 要 目的：构建抗肺腺癌的单链抗体 (seFv)，研究其表达条件，为将这一小分子抗体应用于临床奠定基础。方法 ：将抗人 肺腺癌单克隆抗体的重链及轻链可变区基因插人表达载体pFUW80、pTH、pit，分别在太肠杆菌XL1一Blue、ToplO、GI698／GI724中 诱导表达 ，得到噬菌体抗体或包涵体。用 SDS和 ELISA鉴定检测活性。结果 ：SDS的结果表明．在pTH和 pTF的表 达产物中，有一条 43kD的特异条带 ，其分子量与预期相符 ，单链抗体 以包涵体形式 出现 ．其表达量达细菌总蛋白的 186％。 ELISA的结果表明．噬菌体抗体和经复性处理的包涵体具有与亲本单抗相 同的特异性。结论 ：成功地构建和在太肠杆菌中表 达了抗肺腺癌单链抗体。 关键词 人肺腺癌；单链抗体 ；噬菌体抗体：ELISA；包涵体