实验肿瘤学基本概念.PPT

实验肿瘤学基本概念 肿瘤发生发展的一般过程 正常细胞 癌细胞 原位癌 浸润癌 转移癌 休 眠 预防 诊断 治疗 肿瘤细胞的生物学特点 自我满足的生长信号 对生长抑制信号不敏感 逃避凋亡 无限增殖的潜能 血管生成 浸润和转移 实验肿瘤模型的要求 忠实地重现人类肿瘤的生物学特性 实验肿瘤学的研究方法 直接研究 建立细胞系 建立动物模型 细胞系的基本概念 组织培养和细胞培养：模拟体内环境在体外培养机体组织和细胞，使之生存和生长。 原代培养（primary culture）:从体内取出组织和细胞的第一次培养。 传代（passage）：细胞长满培养瓶后，细胞分成2-3瓶继续培养。 细胞系（cell line）:原代培养细胞首次传代成功后的细胞，称细胞系。Finite cell line, continuous cell line, established cell line 细胞株(cell strain):通过选择或克隆，从亲代细胞系选出的带有特定标志的细胞群。 瘤株：在动物体内可传代的肿瘤细胞系。 ATCC American Type Culture Collection 美国模式培养物收集中心, 美国菌种保存中心 培养细胞的生长方式 贴附生长型细胞：细胞附着于支持物表面生长。 上皮细胞型：来源于外胚层和内胚层的细胞，细胞为扁平多角形，细胞之间紧密相靠成片。 成纤维细胞型：来源于中胚层的细胞，细胞呈梭形，排列成漩状、放射状、栅栏状。 悬浮生长型：造血系统的细胞 培养细胞的生长特点 贴附生长：支持物可为玻璃、塑料、胶原、其他细胞等。 停泊或贴壁依赖性细胞（anchorage-dependent cell) 接触抑制(contact inhibition)：正常细胞相互接触后，细胞将向另一个方向移动，从而使细胞不会重叠生长。 密度抑制(density inhibition)：正常细胞汇合成片后细胞分裂停止，在静止状态下细胞存活一段时间 汇合 confluent 培养条件 基本营养成分 RPMI1640 DMEM (Dulbeccos modified Eagle medium) 谷氨酰胺 生长因子 小牛血清 胎牛血清 灭活补体 56℃ 30min 环境 37℃ pH 7.2-7.4 渗透压 无污染无毒 细菌、支原体 体外培养的优点 优点：1.活细胞， 2.对象均匀，易控制实验条件，易于观察和纪录实验结果 3.易研究单个细胞的结构和功能，易于进行分子生物学水平研究， 4.实验周期短，成本低，细胞系可长期保存。 体外培养的缺点 1.在体外细胞生物学行为与在体内不完全一样， G1 G0 终末分化 肿瘤细胞 M S 介质细胞 G2 2.转化（transformation）: 在体外培养过程中细胞的遗传性状发生变化。分为一般转化和恶性转化。 一般转化：指细胞获得不死性。 恶性转化：指出现在软琼脂培养基中浸 润生长；在动物体内成瘤；血清依赖性降低；生长密度依赖性降低。 3. 体外实验结果不能外推到体内实验 细胞培养的应用 研究细胞与环境的相互作用 细胞间的相互作用 细胞内胞质活动 细胞质与细胞核之间的流动 建立细胞系的基本要求 细胞在体外培养半年以上，生长稳定，保持细胞特征并能传代。 建系方法 1.原代培养：无菌操作， 取肿瘤组织，切成小片，小于0.5毫米，进行培养， 或用胰酶、胶原酶消化成单细胞悬液，血清灭活酶，培养 2.传代：待细胞长满培养瓶，胰酶消化，按1：2-3传代 3.去除杂细胞 4.冻存细胞 10%DMFO+90%胎牛血清， 4℃ 30min, →-20℃ 2hrs, → -70℃ 过夜, →液氮，长期保存。 登记，定期复苏细胞。 复苏：37℃ 水浴，加培养基洗一次，培养 5.鉴定 鉴 定 细胞形态观察 癌细胞多角型，重叠生长， 核浆比例失调，多核巨细胞 染色体分析 数量和核型、核带，标记染色体 细胞生长曲线和细胞周期 集落形成率 动物接种 成瘤， 组织形态学与原发肿瘤相似 污染 无病毒、支原体污