口腔上皮基因组DNA与鉴定课件.docVIP

海南大学农学院09级生物科学专业 许连华 20090110310061 人口腔上皮细胞提取基因组DNA及PCR-RFLP法鉴定CYP2C9基因 一 实验目的 1、练习酚-氯仿法提取人的基因组DNA 2、掌握PCR法分离全基因组中特定基因的原理和方法 3、熟悉RPLF法鉴定遗传多态性并掌握其鉴定基因型的原理 二 实验原理 1、酚-氯仿法抽提基因组DNA的原理 在EDTA存在下，用蛋白酶K消化细胞，用去垢剂溶解细胞膜，用酚抽提，除去杂蛋白、RNA及其他大分子，用异丙醇或乙醇沉淀可得到口腔上皮基因组DNA。 2、PCR法分离基因的原理 PCR即聚合酶链式反应的原理类似于DNA的天然复制过程。在带扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，DNA聚合酶以单链DNA为模板利用反应体系中的dNTP,按5′→3′方向经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n。 3、RFLP的原理 RFLP即限制性内切酶片段多态性是基因型之间限制性片段长度的差异，是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变引起的。 CYP2C9是细胞色素P450超家族的成员之一。是一类主要存在于肝脏、肠道中的单加氧酶，催化多种内外物质的代谢。目前约有16%的临床药物由CYP2C9负责代谢。CYP2C9具有高度的多态性。T269C是位于CYP2C9基因第二外显子的一个多态