柑橘衰退病、裂皮病与碎叶病的多重RT—PCR检测方法研究.pdfVIP

维普资讯 植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASIN1CA 37(1)：31-35(2007) 柑橘衰退病、裂皮病和碎叶病的 多重 RT—PCR检测方法研究 肖远辉 ，曾继吾 ，张秋明 ，周碧容 (湖南农业大学园艺园林学院，长沙410128；广东省农业科学院果树研究所，广州510640) 摘要：本研究以广东省农业科学院果树研究所隔离网室内通过嫁接分别感染CTV、CEVd和 CTLV的柑橘树皮为实验材 料，建立了以oligo(dT)为反转录引物的RT—PCR检测体系，成功检测到在病毒RNA3末端带有ploy一(A)加尾的CTV和 CTLV。实验过程中，发现不具有 ploy一(A)加尾的环状类病毒 CEVd，同样可以用 oligo(dT)反转录的I一PCR检测出来， 通过测序分析 ，其同源性在96％以上，并发现在CEVd序列中有一个富含A的区段。在此基础上，进一步研究了同时检测 CTV、CEVd和CTLV的多重RT—PCR检测体系，该方法能为这3种病害的检测简化步骤、节省时间、降低成本。 关键词：柑橘衰退病毒 (CTV)；柑橘裂皮病类病毒(CEVd)；柑橘碎叶病毒 (CTLV)；多重RT—PCR；oligo(dT)18 SimUltaneous detection ofCitrus tristeza virus(CTV)。Citrus exocortis viroid (CEVd)andCitrustatterleafvirus(CTLV)bymultiplexRT-PCR XIAOYuan—hui， ZENG Ji—WU ，ZHANG Qiu—ming，ZHOU Bi—rong (CollegeofHorticulture，HunanAgriculutralUniversity， Changsha410128，China；FruitResearchInstiutteofGuangdongAcademyofAgriculutralSciences，Guangzhou510640，China) Abstract：Byuseofanoligo(dT)18asareversetranscriptionprimer，polyadenylatedRNAvirusesCTVnad CTLV weredetectedbyRT—PCR．CEVd couldbealso detectedinthisway．CEVd isanon—polyadenylated RNA viroid，butthereisafragmentrichinA inCEVdsequence．OnhtebasesofuniplexRT—PCR，amulti— plexRT—PCR wasdeveloped todetectCTV ，CEVd na dCTLV simultaneously．Theresultsofhtemultiplex RT—PCR to detecteach ofhtepahtogenswere consistentwiht uniplex RT—PCR．Th emultiplex RT—PCR providesasimplena drapidmethodfordetectingCTV ，CEVdna dCTLV incitrusplnatsinalargenumberat htesametime． Keywords：Citrustristezaviurs；Citursexoconisviroid；Citursta~erleafviurs；multiplexRT—PCR； oligo(dT)18 中图分类号：$436．661．1 文献标识码：A 文章编号：0412-0914(2007)01-0031-05 柑橘衰退病毒 (Citurstnstezaviurs，CTV)、柑 病毒。根据不同分离物在 5种指示植物上显示的 橘裂皮病类病毒 (Citursexoconisviroid，CEVd)、 症状，可以把 CTV分为3个株系：衰退株系、茎陷 柑橘碎叶病毒 (Citurstatterleafviurs，CTLV)是3 点株系和苗黄株系。其中茎陷点株系对我国的危 种严重威胁柑橘生产的