凡纳对虾体内ACP、AKP酶的细胞化学定位.pdfVIP

第46卷 第6期 复旦学报(自然科学版) V01．46 No．6 2007年12月 Journal of Fudan University(Natural Science) Dec．2007 文章编号：0427—7104(2007)06—0947—05 凡纳对虾体内ACP、AKP酶的细胞化学定位 孙静秋 ，许 燕 ，张慧绮 ，叶军强2 (1．上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234；2．上海奉贤区水产技术推广站，201400) 摘 要：运用电镜酶细胞化学技术对凡纳对虾体内肝脏(L)、肌肉(M)、心脏(H)和复眼(E)等四种组织的酸性磷 酸酶( CP)、碱性磷酸酶(AKP)进行了细胞化学定位，并与感染病毒的凡纳对虾四种组织中ACP、AKP的细胞化 学定位进行比较．结果显示，在健康的对虾体内，ACP依次出现在各组织中的溶酶体、细胞核、细胞内膜、线粒体、 内质网以及肝脏组织中的部分脂滴周围及微绒毛中AKP依次出现在各组织中的细胞膜、细胞核、溶酶体、内质 网以及肝脏组织中的脂滴周围及微绒毛中．感染病毒后，对虾体内组织细胞出现了明显的病理变化，各组织细胞 内均出现大量的髓样小体；各组织中ACP， 的超微细胞化学定位也发生了明显的规律性变化，表现为相应 细胞器内ACP，AKP酶活性均减弱或消失，并在多数组织的细胞质中检测到ACP，AKP酶活性的高电子密度颗 粒，且大量出现的髓样小体均呈阳性反应． 关键词：凡纳对虾；病毒；酸性磷酸酶；碱性磷酸酶；细胞化学定位 中图分类号：Q 955 文献标识码：A 凡纳对虾(Litopenaeus vannarnei)也称南美白对虾，是我国主要的水产养殖虾类，具有很高的经济价 值l1j．近些年由于高密度养殖、近亲繁殖和过量投饵等原因，导致对虾种质严重下降，由各类病毒引起的 传染病逐渐增多 j．自上世纪60年代首次报道对虾病毒病以来，病毒病已经成为当前对虾养殖的最大威 胁，引起了国内外越来越多的关注． 酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)均为磷酸单酯酶，不仅能催化磷酸单酯水解，还直接参与磷酸 基团的转移，是动物体内重要的解毒体系．并且在动物机体的骨化过程中及在磷化物和其他一些营养物质 的消化、吸收和转运过程中起着重要作用l34j．在对甲壳动物的研究中，已把ACP和AKP看作是具有免疫 功能的酶，可共同用来作为检测甲壳动物免疫功能的指标酶l5j．目前为止，对甲壳类等动物血细胞中的 AcP、AKP酶细胞化学定位的研究，国内外已有相关报道[6-7]．但有关凡纳对虾体内肝脏、肌肉、心脏和复 眼等四种组织中这两种酶的细胞化学定位及感染病毒后的细胞化学定位变化研究国内外尚未见报道．采 用电镜酶细胞化学技术，以健康和患病毒病的凡纳对虾的肝脏、肌肉、心脏和复眼为材料，在透射电镜下观 察这四种组织中ACP、AKP的酶活性反应部位，分析比较感染病毒前后虾体四种组织中的ACP、AKP细 胞化学定位差异，为进一步认识南美白对虾体内各组织中ACP、AKP的免疫作用提供基础资料． 1 材料和方法 1．1 材料 在2006年7、8月虾病流行期间，从上海市奉贤区水产技术推广站获取凡纳对虾病毒病虾和健康虾成 体，体长约7～8 crn． 1．2 方法 1．2．1 样品制备 将健康凡纳对虾和受病毒感染的凡纳对虾分成两组，活体解剖，每组各4只，分别取其复眼、肝脏、心 脏和肌肉，并切成1 mm。的小块，同时对这两组对虾的相同组织设立对照组． 收稿日期：2007—06—10 基金项目：上海市教委高校科技发展基金项目(No．05DZ30) 作者简介：孙静秋(1980一)，女，硕士研究生；通讯联系人许 燕，女，副教授，E—mail：xuyan6@shnu．edu．cn 复旦 学报(自然科学版) 第46卷 1．2．2 ACP孵育反应 参照钟慈声的方法l8]配制ACP孵育液．将在4℃条件下经过4％多聚甲醛一2％戊二醛固定1 h的各 组织小块，二甲胂酸钠缓冲液漂洗后分别放入pH 5．2的ACP孵育液和对照液中37℃条件下反应1 h(对 照液不含 一甘油磷酸钠)．0．05 mol／