液相色谱-串联质谱法测定头发中10种蛋白同化激素.pdfVIP

第35卷 分析化学(FENXIHUAxUE)研究报告 第7期 of 2007年7月 chjneseJ删alAnalyti捌Cbe皿is哆 949—953 液相色谱一串联质谱法测定头发中10种蛋白同化激素 严慧1 向平2 王萌烨1 沈保华2 沈敏让 (复旦大学上海医学院法医学系，上海200032)2(司法部司法鉴定科学技术研究所，上海200063) 摘要建立了同时测定头发中10种蛋白同化激素液相色谱一串联质谱(I肜Ms／Ms)分析方法。头发样品 经NaoH消鼹、戊烷液液提取后，用反相液相色谱分离，电喷雾正离子源进行离子化，用多反应监测方式 (MRM)对这10种蛋白同化激素的母离子及子离子进行监测，三重四极杆质谱测定。10种蛋白同化激素的 检出限为1—20 数(R2)为0．9958～O．9999。本方法简便快速、灵敏度高、专属性强，可满足在兴奋剂检测或毒物分析中对毛 发中蛋白同化激素测定的要求。 关键词蛋白同化激素，液相色谱．串联质谱，头发 1 引 言 蛋白同化激素(anabolicandro学enicsteroids，AAs)是一类在结构及活性上与人体雄性激素睾酮相似 的化学合成衍生物。这类药物可用于治疗严重的营养缺乏和骨质疏松症、艾滋病患者、长期卧床的病人 及被严重烧伤者，但它同时也是使用频率最高的一类运动兴奋剂。它的滥用损害生殖系统、心血管系 统、肝脏等，导致运动员心理和行为异常。蛋白同化激素是国际奥委会规定的所有场合(包括赛内和赛 外)都禁用的物质。 国际奥委会规定的蛋白同化激素检测标准是采用Gc／MS来分析尿样…。毛发由于性质稳定，易 取材和保存，检出时限长，可弥补尿检的缺陷以及反映用药史等优点而受到越来越多的关注。 目前国际上主要采用GC／Ms法测定头发中蛋白同化激素【2“J。蛋白同化激素大都含有羟基、羰 基，需经过复杂的衍生化步骤后才能用Gc／Ms测定。而应用LC／MS／Ms检测时无需进行衍生化哺J，简 单、省时，在保证灵敏度的情况下还可以达到在目标范围内未知化合物筛选的目的∞J。L(I／MS／Ms由于其 高分离效能、高选择眭和高灵敏度，尤适用于头发中AAS这样药物浓度低(ng／g级)、检材复杂的案例。 本研究采用LC／MS／MS对头发中10种蛋白同化激素进行研究实验，建立前处理简单、灵敏度高、 专属性好的分析方法，为兴奋剂检测提供了简捷、高效、可靠的分析测定方法。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 Agilent公司)。美替诺龙、司坦唑醇、美雄酮、乙基诺龙、羟甲睾酮、甲睾酮、诺龙、勃地酮、睾酮、表睾酮、 Sei- 雄酮、表雄酮和内标氘代表睾酮标准品(美国C耐uiarIt公司)。甲醇和戊烷均为色谱纯(美国Fisher 析纯。空白头发来自无药物滥用史的健康人。 2．2储备液的制备 将美替诺龙、司坦唑醇、美雄酮、乙基诺龙、羟基甲睾、甲睾酮、诺龙、勃地酮、睾酮、表睾酮标准品用 甲醇配制成10 mg／L的混合标准溶液，备用。 2．3色谱质谱条件 2006·11．27收稿；2007旬1j29接受 本文系国家自然科学基金资助项目(No 事E—Illail：052101056@fud柚．edu．cn 950 分析化学 第35卷 z0RBAx mm×2．1 mmoL／L乙酸胺 Agilent SB．C18色谱柱(150 mm，5斗m)；流动相：A．甲醇；B．20 min，73％A一 和甲酸缓冲液；C．水。采用梯度洗脱程序：一10—0min(平衡时间)，73％A，27％C；0—7 75％A，O％B。10％B．23％C。15％C；7～8 min，50％A～73％A。45％B。O％B。5％C。