DB21∕T 2209-2013 海绵种属分子生物学鉴定技术规程.pdfVIP

ICS 65.150 B51 DB21 宁 省 地 方 标 准 DB 21/T 2209 2013 海绵种属分子生物学鉴定技术规程 Technical Specification of Identifying Sponge through Molecular Biology Techniques 2013 - 12 - 12 发布 2014 - 01 - 22 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB 21/T 2209 2013 前 言 本标准是按照GB/T 1.1 2009给出的规则起草的。 本标准由大连海洋大学提出。 本标准由大连市质量技术监督局归口。 本标准主要起草单位：大连海洋大学、中国科学院大连化学物理研究所 本标准主要起草人：付晚涛、郑长波、曹旭鹏、苏延明、宋悦凡、潘勍宇、安宗福。 本标准于2013年**月** 日首次发布。 I DB 21/T 2209 2013 海绵种属分子生物学鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了海绵种属分子生物学鉴定的总则、海绵样品采集与保存、海绵种属鉴定方法。 本标准适用于海绵的样品采集、保存、处理和种属分子生物学鉴定方法。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于 文件。 2.1 海绵 海绵（Sponge ）是最低等多细胞动物（Metazoan ），在动物界中单独构成多孔动物门（Phylum Porifera）。 2.2 海绵分子条码 海绵的细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（cytochrome oxidase subunit Ⅰ，简称COI ）的DNA序列为海绵的保 守基因序列信息，作为海绵分子条码。 3 总则 3.1 原理 海绵细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（COI ）的DNA 序列为海绵的保守基因序列，作为海绵分子条码，用 于鉴定海绵种属。通过分子生物学技术——聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction ，简称PCR ） 扩增海绵的COI 基因部分序列，测序后与已经鉴定海绵的COI 基因序列比对，以此鉴定海绵的种属。 3.2 仪器与设备 ——野外生物样品保存箱或泡沫保温箱； ——高速低温冷冻离心机； ——普通PCR 仪； ——水浴锅； ——-80 冰柜。 3.3 试剂与材料 ——无水乙醇（分析纯）； ——液氮； ——细胞裂解缓冲液（10 mmol/L Tris-Cl，pH 8.0；1 mmol/L EDTA，pH 8.0 ；0.1%(m/V) SDS ）； ——异丙醇（分析纯）； 1 DB 21/T 2209 2013 ——醋酸甲溶液（60ml 5 mol/L 醋酸钾；11.5 ml 冰醋酸；28.5 ml 超纯水）； ——细胞裂解液（20 mmol/L Tris-Cl，pH 7.6 ）； ——蛋白酶K （20 mg/ml ）； ——TE 缓冲液（pH 7.6 ）（100 mol/L Tris-Cl，pH 7.6