实验一 质粒DNA的制备.ppt

分子生物学实验 前 言 遵守实验室守则 爱护实验仪器，严格按照使用说明操作 保持实验室卫生 物品用后归放原位 危险、致癌药品的使用一定要带手套，在通风橱中进行 严禁在实验室内吃喝，吸烟，化妆，离开实验室时必须洗手！ 常 用 仪 器 微量移液器，Tip头，离心管 高速离心机、冷冻离心机 PCR仪，PCR管 超纯水仪 制冰机 电泳仪及电泳槽 凝胶成像系统 常 用 方 法 核酸的提取（DNA，RNA，质粒） 核酸的检测（凝胶，OD值） 序列的测定 转化，重组 分子杂交，PCR 琼脂糖凝胶电泳图 聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS有毒试剂 液氮：-185℃，使用时要带上隔热手套 氯仿（三氯甲烷）：对粘膜、上呼吸道、皮肤和眼睛有刺激效应，是致癌物，也可能损害肝和肾 溴化乙啶（EB）：强的诱变剂和具有中度的毒性，一定要带手套！ 质粒载体的基本结构 pUC19质粒载体图谱 三、实验试剂 溶液Ⅰ： 50mM 葡萄糖 25mM Tris·HCl（pH8.0） 10mM EDTA 溶液Ⅲ： 5M KAC 60ml 冰醋酸 11.5ml 水 28.5ml 溶液Ⅱ：（新鲜配制） 0.2M NaOH 1% SDS 无水乙醇、 70%乙醇 、 RNase 、 琼脂糖、 无菌水 LB液体培养基 Amp 50mg/ml 曲丽娜 Te