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人工种子 artificial seed —— 铁皮石斛人工种子制作及影响因素研究 《 中草药 》 作者： 张桂芳 2011年9月 人工种子简介 人工种子（artifical seed） 是将植物离体培养产生的 体细胞胚包埋在含有营养 成分和保护功能的物质中 ，在适宜的条件下发芽出 苗。 实验目的：建立铁皮石斛人工种子制作方法，并考察相关影响因素，为铁皮石斛的繁育提供一条新途径。 实验材料：铁皮石斛原球茎（种子萌发所得）为包埋体制作人工种子 铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo 兰科石斛属植物 我国传统名贵中药 种子极小、无胚乳， 自然条件下需与某些 真菌共生才能萌发。 试管苗生产周期长、 成本高、移栽驯化过 程长。 实验过程： 种子无菌萌发→ 原球茎增殖 →铁皮石斛人工种子制作 (滴注法） 包埋体：长2.0～4.0mm、宽2.0～4.0 mm的原 球茎 人工胚乳：MS＋0.5 mg/L BA＋0.5 mg/L NAA＋3 g/L活性炭（AC）＋30 g/L海藻酸钠＋3 g/L百菌清，添加5～40 g/L木薯淀粉、10～60 g/L保水剂 人工种皮: 海藻酸钠 原球茎及种子萌发情况： 1不同影响因素对人工种子包埋效果和萌发的影响 海藻酸钠用量（A）、BA与NAA质量浓度比例（B）、 离子交换时间（C）、活性炭用量（D） 萌发标准：突破种皮2mm 成苗标准：幼苗完全突破种皮，并能在琼脂胶上成活 每组10~15粒，3瓶，重复3次。 综合加权评分法：以一个综合指标（ＯＤ）将各个指标进行综合考察，以综合指标进行直观分析。 其中铁皮石斛人工种子中萌发率（Ａ）与成苗率（Ｂ）作为主要参考指标，分别赋予Ａ、Ｂ系数，计算公式为： 　ＯＤ＝（０.６×Ai/Aｍ+0.4×Bi/Bｍ) ×100 （Ai、Bi为各组实验的萌发率、成活率；Aｍ、Ｂｍ是最高萌发率，成活率） Ｋ，Ｒ值由SPSS 11.5统计软件进行统计学分析 则由表２结果看出，４对铁皮石斛人工种子萌发和成苗都有影响，最主要因素是A、C、D，稍次要因素是B。综合考虑可以选择4为人工种子较佳的制作条件。 30g/L海藻酸钠包埋种子大小均匀，硬度适中。 另3g/L活性炭可能因为较好的吸附和解吸附能力，对种子的萌发有利。 2 人工胚乳中加入木薯淀粉 组间差异显著性 Duncan’s 新复极差法进行多重比较检验。 不同字母表示两均数间差异显著，小写字母表示0.05显著水平，大写字母表示0.01显著水平 由表3可以看出，木薯淀粉量为0~15g/L时人工种子萌发率和成苗率随其量增加而提高，高于15g/L，黏度太大，难以形成球状胶粒。故15g/L为最佳木薯淀粉量。 可能原因:木薯淀粉分子较多的亲水基团，利于保水增加团粒结构，另外其多孔结构增加胶囊的通气性。或种胚分泌胞外酶来利用木薯淀粉 3 人工胚乳中加入保水剂 由表4看出：添加低浓度的保水剂有助于提高人工种子的萌发率和成苗率，其中以10g/L为最佳。随着