壮筋续骨汤对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量和Cbfal基因表达影响的研究.docVIP

壮筋续骨汤对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量和Cbfαl基因表达影响的研究 王力 郑甦 杨凤云 邓运明 王丽华 熊兴勇 (江西中医学院附属医院关节骨科，江西 南昌 330006) 摘要：目的 探讨壮骨续筋汤对大鼠成骨细胞功能态的影响 方法 采用含药血清的方法体外培养成骨细胞，分壮骨续筋汤组、对照组，观察各组碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量及Cbfαl基因的表达；结果 壮骨续筋汤组的碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量及Cbfαl基因的表达强于对照组（P＜0.05）。结论 壮骨续筋汤能促进成骨细胞功能态的发挥。 关键词：壮骨续筋汤 成骨细胞 碱性磷酸酶比活性 骨钙素 Cbfαl基因 【Abstract】 Objective: To study the effect of Zhuanggu Xutong recipe to the function of the SD rats， osteoblast . Methods: According to the drug containing serum methods , the osteoblast of SD rats were cultured. They were divided randomly into two groups: Zhuanggu Xutong recipe group and comparison group, the specific activity of alkalinity phosphatase(ALP) , the contents of bone glacontaining protein(BGP) and the expression of core binding factor α1 were observed in each group; Results: the specific activity of ALP , the contents of bone glacontaining protein(BGP) and the expression of core binding factor α1of Zhuanggu Xutong recipe group were higher than comparison group （P＜0.05）. Conclusion: Zhuanggu Xutong can increase the function of the SD rats， osteoblast . Key words: Zhuanggu Xutong recipe Osteoblast Specific activity of alkalinity phosphatase Bone glacontaining protein Core binding factor α1 体外培养细胞，有两种基本状态：即增殖态和功能态。功能态为细胞进行特定功能活动如分泌、传导、吞噬、收缩等的时期，是细胞的第二种生存状态。本研究以中药壮筋续骨汤作为研究对象，采用中药血清药理学的方法体外培养成骨细胞，观察其对碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量及Cbfal基因的表达等功能态的影响。 1 实验材料 1.1 仪器与试剂 倒置相差显微镜（日本OLYMPUS）、CO2培养箱（德国Heraeus）;DU650 紫外分光光度计(美国BECKMAN)；α－MEM (HyClone)、新生牛血清（NCS, HyClone）、青－链 霉素溶液(HyClone)、HEPES (上海生工)、胰蛋白酶（1：250,AMRESCO）、β－甘油磷酸 _______________________________________________________________________________ 基金项目：aq酶（上海生工）；反转录酶（上海生工）；引物（上海生工合成）等。 1.2壮筋续骨汤的制备 当归10g、菟丝子20g、西党20g、补骨脂20g、刘寄奴20g、川芎10g、白芍10g、杜仲10g、桂枝10g、三七10g、煅狗骨10g、木瓜310g、熟地40g、川断15g、五加皮15g、骨碎补30g、黄芪30g、蛰虫10g,上药加双蒸水8倍，浸泡2小时，煮沸1小时，收集药液，再加双蒸水6倍，煮沸1h，收集药液，再加双蒸水，煮沸1小时，合并三次药液，以3000r／min离心30min，取上清，4℃冰箱保存。 1．3实验动物的购买及饲养 SD大鼠60只（清洁级30天龄），雌雄各半，每只体重280±20g，购自浙江省实验动物中心。动物进入动物实验中心后适应性饲养三天，给予普通饲料饲养、自由活动、自由饮水、通风、光照