医疗器械微生物检验课件201012.ppt

医疗器械微生物限度检验 何燕英 heyy2006@126.com 广东省医疗器械质量监督检验所 2010年12月 概述 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。 概述 微生物：形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物 特点： 1、 个体微小，一般0.1mm 2、构造简单，有单细胞的，简单多细胞 的，非细胞的 3、进化地位低 分类：原核类：二菌，四体（细菌、放线菌、螺旋体、支原体、立克次氏体、衣原体） 　 真核类：真菌，原生动物，显微藻类　　 非细胞类：病毒，亚病毒 概述 按医疗用品与人体接触的性质以及对人体使用安全性要求分三类： a)Ⅰ 类医疗用品：接触人体完整皮肤的医疗 用品 b) Ⅱ类医疗用品：接触人体未破损粘膜的医疗 用品 c) Ⅲ类医疗用品：进入人体无菌组织、器官和血液 以及接触破损皮肤和粘膜的医疗 用品 常用检测标准 《中华人民共和国药典》 2010年版二部附录XI J “微生物限度检查法”。 GB 15979-2002 《一次性卫生用品卫生标准》附录B 实验条件 无菌操作技术 实验环境 实验器材 无菌操作技术 微生物学基础 微生物实践基础 无菌操作意识 实验环境 洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域或隔离系统 定期按GB/T16292-16294-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证 实验中监控：实验时将制备好的营养琼脂平板打开放于实验台上，至实验结束收起，30 ℃ ~35℃培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm 实验器具 仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。 用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精密pH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、牛皮纸等。 实验准备 实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法 实验环境保证 环境清洁，表面消毒（ 75%(V/V)乙醇、新洁尔灭(1：1000)溶液或其他适宜消毒溶液） 空气过滤系统，紫外灯或臭氧空气消毒仪 实验试液 稀释剂 1.0.9%氯化钠溶液 2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液 3.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：调解pH至近中性，其中蛋白胨对菌细胞有保护作用，有利于菌落数及控制菌测定。 表面活性剂、中和剂或灭活剂 鉴定用试剂 1.靛基质试液 2.1%二盐酸二甲基对苯二胺试液（氧化酶试液） 3.三氯甲烷 4.1mol/l盐酸试液 培养基 标准菌株处理及增菌用培养基 选择性培养基 鉴别培养基 培养基 培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6。酵母菌霉菌（6.0～6.5）。 调节可用1N HCl或NaOH。 培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损失培养基的必需营养成分。 制成的培养基应透明，以便观察细菌生长性状以及其他代谢活动所产生的变化。 灭菌方式 湿热：115 ℃ ~121 ℃，15min~30min 物品切勿立即取出置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染菌。 干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭菌。 灭菌程序需要经过验证 计数培养基适用性检查 细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 计数培养基适用性检查 菌种 大肠埃希菌　 　　［CMCC（B）44 102］ 金黄色葡萄球菌　［CMCC（B） 26 003］ 枯草芽孢杆菌 　［CMCC（B） 63 501］ 白色念珠菌 　　　[CMCC(F)　 98 001]　 黑曲霉 　　　　 [CMCC(F) 98 003]　 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 计数培养基适用性检查 菌液制备 细菌新鲜培养物（一般