仪器分析 第五章--分子发光分析(2010年修改稿).pptVIP

第五章 分子发光分析法 1. 概述 2. 荧光与磷光的产生过程 3. 激发光谱与荧光(磷光)光谱 4. 荧光效率及其与分子结构的关系 5. 影响荧光强度的因素 分子发光： 基态分子吸收一定能量，跃迁至激发态，当激发态分子以辐射跃迁形式将其能量释放返回基态时，产生分子发光。依据激发的模式不同，分为： 1. 概述 2. 荧光与磷光的产生过程 2.2 电子激发态的多重度 2.3 激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程： 非辐射能量传递过程： 辐射能量传递过程： 辐射能量传递过程： 3. 激发光谱与荧光(磷光)光谱 3.2 荧光光谱(或磷光光谱) 3.3 激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释： 4. 荧光效率及其与分子结构的关系 4.3 分子结构与荧光 5. 影响荧光强度的因素 5.4 内滤光作用和自吸现象 5.5 荧光猝灭 章节重点： 荧光分析法特点； 辐射跃迁、非辐射跃迁的形式及各自特点； 荧光效率定义及特点； 分子结构对荧光的影响； 自吸现象及荧光淬灭。 第五章 分子发光分析法 1. 仪器与结构流程 2. 荧光分析法和应用 1. 仪器结构流程 仪器光路图 同步扫描技术： 磷光检测： 2.1 定量依据 2.2 定量方法 2.3 荧光分析法的应用 章节重点： 荧光分光光度计组成及特点； 荧光分析定量依据。 1. 基本原理 2. 化学发光分析法特点 3. 装置与技术 5.3 其它因素 pH值：大多数含有酸性或碱性取代基团的芳香族化合物的荧光性质受溶液pH值的影响很大。 表面活性剂：荧光物质处于更有序的胶束微环境中，对处于激发单重态的分子起保护作用，减小非辐射跃迁的概率，提高荧光效率。 溶解氧：氧分子具有顺磁性质，使系间窜跃速率加大，荧光效率降低。其它顺磁物质也有这种作用。 自吸现象：化合物的荧光发射光谱的短波长端与其吸收光谱的长波长端重叠，产生自吸收；如蒽化合物。 内滤光作用：溶液中含吸收激发光或荧光物质。 碰撞猝灭：激发态分子之间的碰撞，导致非辐射跃迁概率增加，荧光效率下降。 荧光淬灭剂：溶解氧、产生重原子效应的溴化物、碘化物等。 自淬灭效应：荧光自吸收现象。 第二节 荧光分析仪器 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 单色器：光栅； 光源：氙灯、高压汞灯，染料激光器； 检测器：光电倍增管。 特点：两个单色器，样品池光路成90度直角 同步扫描可分为固定波长差、固定能量差、可变波长三种。 简化光谱：谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率。 合适的??可减少光谱重叠：酪氨酸和色氨酸激发光谱相似，荧光发射光谱严重重叠，??15 nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； ??60 nm时，只显示色氨酸特征光谱，实现分别测定。 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。在有荧光发射的同时测量磷光。 磷光镜：借助于荧光和磷光寿命的差别，将荧光隔开。 脉冲光源和可控检测及时间分辨技术。 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗-比耳定律： If = ? I0(1-10-A ) = ? I0(1-e-2.3A ) 浓度很低，A小于0.05时，括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc 2. 荧光分析方法与应用 标准曲线法：配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 比较法：在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 与有机试剂形成配合物后测量；可测量约60多种元素。 (1) 无机化合物的分析 (2) 生物与有机化合物的分析 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定 第五章 分子发光分析法 1. 基本原理 2. 化学发光分析法特点 3. 装置与技术 第三节 化学发光分析 在化学反应过程中，某些化合物接受能量被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。 A +B = C + D* D* → D + h? 1.1 化学发光反应 * 第一节 荧光分析法 光致发光：分为荧光和磷光 热致发光 场致发光 化学发光 荧光分析法历史： 16世纪，观