植物愈伤组织诱导培养实验指导--李老师.docVIP

植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导 实验目的； 通过植物组织的学习和训练，使学生了解植物组织培养的基本原理和操作技术，初步掌握MS固体培养基制备方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。 二 实验原理：器官或组织放一团薄壁细胞， 三、实验 实验1-1、植物组织培养基母液的配制和保存 实验1-2、MS培养基 实验1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导 2、基本原理? 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据所需浓度，按比例稀释。本实验以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。 MS培养基母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长母液，在不同类型的培养基中使用 3、实验仪器设备和试剂 酸度计磨口试剂瓶微波炉 3.2试剂 （1）95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 （2）MS培养基成分： ①大量元素(母液Ⅰ)：NH4NO3、KNO3、CaCl2.2H2O、MgSO4.7H2O、KH2PO4； ②微量元素(母液Ⅱ)：KI、H3BO3、MnSO4.4H2O、ZnSO4.7H2O、Na2MoO4.2H2O、 CuSO4.5H2O、CoCl2.6H2O； ③铁盐(母液Ⅲ)：FeSO4.7H2O、Na2.EDTA.2H2O； ④有机成分(母液,维生素和氨基酸)：肌醇、盐酸吡哆醇(维生素B6)、烟酸(Vpp)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸； （3）植物生长调节物质：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。 4、操作步骤 （1） MS大量元素母液的配制 注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 母液 化合物名称 培养基用量（mg/L） 扩大倍数 称取量(mg) 母液体积(mL) 1L培养基吸取母液量（mL） 大量元素 KNO3 1,900 10 4,750 250 100 NH4NO3 1,650 4,125 MgSO4·7H2O 370 9,25 KH2PO4 70 425 CaCl2·2H2O 440 1,100 （2）微量元素母液的配制 按照培养基配方的用量，将微量元素各种化合物（除去铁盐）扩大100倍（表2），用万分之一天平分别准确称取，可以混合溶解，最后定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 母液 化合物名称 培养基用量（mg/L） 扩大倍数 称取量(mg) 母液体积(mL) 1L培养基吸取母液量（mL） 微 量 元 素 MnSO4·4H2O 22.3 100 223 100 10 ZnSO4·7H2O 8.6 86 H3BO3 6.2 62 KI 0.83 8.3 Na2MoO4·2H2O 0.25 2.5 CuSO4·5H2O 0.025 10ml* CoCl2·6H2O 0.025 10ml** *、**：因天平均存在误差，为减少误差带来的影响，建议称取0.25g，溶解并定容至10ml容量瓶中，然后移取10ml，加入混合液中。 （3） 铁盐母液的配制 常用的铁盐是FeSO4·7H2O和Na2-EDTA的螯合物，必须单独配成母液。配制时，按照扩大后的用量（表3），分别称取FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，分别溶解后，将FeSO4溶液缓缓倒入Na2-EDTA溶液(需加热溶解)，搅拌均匀使其充分螯合，定容后贮放于棕色玻璃瓶中，贴好标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 母液 化合物名称 培养基用量（mg/L） 扩大倍数 称取量(mg) 母液体积(mL) 1L培养基吸取母液量（mL） 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 373 100 10 FeSO4·7H2O 27.8 278 （4）有机物母液的配制 按照表4 中各成分浓度扩大后的用量，用感量0.0001g天平分别称量各有机物。可以分别溶解定容，分别装入试剂瓶中，也可以混合溶解定容，装入同一试剂瓶中，写好标签，放入冰箱中保存。一般有机物都溶于水，但叶酸（VBc）先用少量稀氨水或1mol/L NaOH溶液溶解；VH（生物素）先用1mol/L NaOH溶液溶解；VA、VD3、VB12应先用95%乙醇溶解，然后再用蒸馏水定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 母液 有机物名称 培养基用量 （mg/L） 扩大倍数 称取量(mg) 母液体积(mL) 1L培养基吸取母液量（mL） 有 机 物 甘氨