毕业论文——徐秀园汇编.docVIP

分　类　号： 密　　级：　　　 学　　号：0803285 毕 业 设 计 题目：蝴蝶兰组培快繁技术研究进展 学生姓名：徐 秀 园 所在系部：园林工程系 专　　　　业：园 林 技 术 指导教师姓名：王 勤 华 2011年4月19日 蝴蝶兰组培快繁技术研究进展 摘要: 蝴蝶兰采用组培快繁技术进行种苗繁殖,具有增殖迅速、增殖率高、易脱毒及可周年生产等优点,是大规模生产蝴蝶兰的唯一途径。按组织培养的一般程序(原球茎的诱导、增殖、分化、生根、移栽)概述了蝴蝶兰组织培养的研究进展，并介绍了种子的无菌播种快繁和丛生芽繁殖途径。分析了蝴蝶兰组培快繁中存在的问题,阐述了组织培养过程中外植体褐变问题的防治措施，并对我国未来蝴蝶兰组培快繁技术研究进行了展望。 关键词: 蝴蝶兰 组织快繁 研究进展 蝴蝶兰,又称蝶兰,被誉为“洋兰皇后”,其花形奇特，色彩艳丽，花期持久，具有极高的观赏和经济价值，是国际上最具有商业价值的四大观赏热带之一。由于蝴蝶兰属于单茎性气生兰，再生能力弱，很难进行分株繁殖，且种子非常细小，在自然条件下很难萌发，增殖系数很低，比其他兰花更难以进行常规的无性繁殖，不能满足日益增长的市场需要。因此，研究蝴蝶兰的繁殖具有重要的意义。组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径。近年来，出现了不少蝴蝶兰的叶片、根尖、茎尖、花梗等外植体进行组培的报道，但尚有许多环节需要改进。蝴蝶兰组织培养程序一般为：选取外植体（叶片、根尖、茎尖、花梗等）→诱导形成原球茎→原球茎大量增殖→分化出小植株→生根壮苗培养→温室移栽。本文对蝴蝶兰组培的研究进展进行了阐述. 1 蝴蝶兰的组培快繁 1.1 从离体器官诱导产生原球茎进行繁殖 1.1.1 原球茎的诱导培养 （1）以叶片为外植体。以叶片为外植体诱导原球茎具有取材容易、广泛、不损害母株等优点。在添加蔗糖的培养基中，叶片为外植体没有原球茎产生，叶片诱导比较困难，一般需要高浓度的植物生长调节剂。将无菌苗叶片切成5mm×10mm大小，接种MS+6-BA15 mg/L +NAA1mg/L,在培养基上，8周后诱导出原球茎。取蝴蝶兰花茎茎节在无菌条件下培养长成幼枝上的叶片切块作外植体，在MS培养基上培养。结果表明，培养基中加 1mg/L NAA 、10mg/L 腺嘌呤、10mg/L 6-BA、1%琼脂、2%蔗糖，容易产生原球茎。以花梗芽培养所得的无菌芽顶部展开的新叶为外植体进行培养，一个月后切口边缘的叶面上白色的原球茎形成。研究同时表明 6-BA和 KT不能诱导出原球茎。取蝴蝶兰幼嫩叶片，采用不同培养基对其进行诱导率效果比较。结果表明，香蕉泥和椰乳（CM）对蝴蝶兰外植体原球茎的形成具有明显的促进作用，另外实验也表明幼苗叶片有利于原球茎的产生，在同一叶片上，基部的切块较叶中和叶尖的诱导率高。 （2）以茎尖为外植体。茎尖是细胞分裂最旺盛的部分，成功率较高。以蝴蝶兰小幼苗茎尖为外植体，接种在MS附加的激素的培养基上，培养25-30d，仅在低浓度诱导出原球茎。6-BA 0.5mg/L 最好，诱导率40%。取新长出的茎尖为外植体，接种在N6培养基上。培养20d后，在不含IAA 的培养基中，茎尖组织不能诱导生成原球茎；当KT为1.0mg/L、IAA 为0.5mg/L时，原球茎的诱导率为100%。茎尖相对其他外植体诱导率较高，达88.5%，最佳激素组合为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。 （3）以根为外植体。取蝴蝶兰新生的根尖消毒，切成0.5—0.8的根段，接种在B5+NAA 1.5mg/L+KT 0.2mg/L+CM 150mg/L上，遮光放置4—5d。2周后根段切口出开始膨大，产生淡绿色瘤状愈伤组织，接种于B5+GA 0.05mg/L+CH 120mg/L中进行增殖培养。大约再经过1个月，愈伤组织表面出现较大绿色颗粒，并逐渐形成芽点，继而分化出芽。芽长到1cm以上时，将其分离，接种到1/2MS+香蕉汁20%+蔗糖2%中进行壮苗培养。 （4） 以花梗为外植体。1直接以花梗为外植体。将花梗切成约1.5—2.0 mm 的薄片，平放在固体培养基MS+6-BA 1—2 mg/L 上，培养2 周左右，可见外植体膨大，2个月后，圆球状的突起增多，长成桑果状原球茎，诱导率可达77%。以花梗节间段为外植体，接种后约30 d开始出现膨大，2 个月后有原球茎形成。同时得出结论：减少MS中大量元素和部分微量元素及有机成分，适当增加少量叶酸和生物素有利于原球茎的形成。在培养基中添加椰乳汁能够明显增加原球茎的发生率。最佳诱导培养基为改良的MS 培养基+6-BA 5.0—7.5 mg/L+NAA 0.5--1.0 mg/L+椰乳汁15 %。以盆栽苗的花梗切片为外植体，在常用的多种培养基上培养，结果发现